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Southern blot et séquençage - Interprétation




  1. #1
    Charles2A

    Southern blot et séquençage - Interprétation

    Bonsoir à tous,
    Je suis en licence droit gestion et en parallèle je suis une licence de biologie à distance. Malheureusement les profs ne peuvent pas répondre à mes questions pendant ces vacances...

    Pourriez vous m'aiguiller sur la bonne voie dans cet exercice ci -dessous.

    " L’étude porte sur une portion du génome de deux enfants (individus 1 et 2) contenant un gène codant une enzyme importante dans le développement musculaire. L’individu 1 présente un taux d’activité enzymatique « normal ». Pour l'individu 2 qui est malade, l'activité enzymatique est toujours très faible. Un Southern blot a été effectué sur le génome des deux individus en utilisant comme sonde le gène entier codant l’enzyme (préalablement rendu simple brin) (Figure 1 ci-dessus). Les génomes ont été préalablement soumis à une digestion par l’enzyme Xho I. Le site de reconnaissance de l’enzyme de restriction Xho I est : C*TCGAG (* = site de coupure).
    La région d’intérêt a ensuite été séquencée par la méthode développée par M. Sanger (Figure 2, ci- dessous).
    Question 1 : Comment interprétez-vous le résultat de l'hybridation moléculaire de type Southern (Figure 2) ? "

    J'ai trouvé d'après les résultats du séquençage :
    Individu 1 :
    5' AAACTGCTCAGCTA 3'

    donc :
    3' TTTGACGAGTCGAT 5'

    Le brin matrice est donc :
    5' TAGCTGAGCAGTTT 3'

    De même pour l'individu 2 et on trouve le brin matrice : 5' TAGCTCGAGCAGTTT 3'

    On constate donc qu'il y a eu une mutation ponctuelle (insertion).

    Cependant je ne comprends pas la question 2 (positionner le site de restriction etc..)

    Question 2 : Traduisez la région d’intérêt pour les deux individus en commençant la lecture à la première base (Figure 2, NB : il s’agit du brin +), positionnez le site de restriction de Xho I sur la ou les séquence(s), donnez toutes les caractéristiques de l’événement mutationnel en affinant votre réponse de la question 1.


    Merci de votre aide éventuelle !

    Charles

    -----


  2. Publicité
  3. #2
    ErmiteBelge

    Re : Southern blot et séquençage - Interprétation

    Bonjour,
    Peux-tu mettres les différentes figures?

  4. #3
    Charles2A

    Re : Southern blot et séquençage - Interprétation

    Bonsoir, le site n'accepte ni mes pdf ni mes png désolé... cependant je viens de m'apercevoir que j'avais fait une erreur.

    Erreur sur le brin matrice de l'individu 1 excusez-moi :

    **Individu 1 :
    AAACTGCTCTAGCTA
    D'où
    TTTGACGAGATCGAT

    Brin matrice (individu 1) :
    TAGCTAGAGCAGTTT

    Brin matrice (individu 2) :
    TAGCTCGAGCAGTTT

    La mutation est donc une transversion ! Je peux vous envoyer la photo par mail ?

    Charles


  5. #4
    Charles2A

    Re : Southern blot et séquençage - Interprétation

    Citation Envoyé par ErmiteBelge Voir le message
    Bonjour,
    Peux-tu mettres les différentes figures?
    Bonsoir, (je n'arrive toujours pas à envoyer les photos) mais je pense avoir avancé :
    Le brin matrice pour l'individu 1(sain) est : 5' TAGCTAGAGCAGTTT 3'
    Pour l'individu 2 (malade), le brin matrice : 5' TAGCTCGAGCAGTTT 3'

    Or le site de restriction de l'enzyme Xho 1 est C*TCGAG (* = site de coupure)

    Et on remarque que la mutation (transversion) qui a transformé le A en C, a fait apparaitre le site de restriction de l'enzyme (CTCGAG) chez l'individu 2.

    Donc on peut en déduire que cette mutation a coupé au niveau de ce site le fragment d'ADN de l'individu 2, ce qui explique le mauvais fonctionnement de son activité enzymatique ?

    Vous pensez que c'est la réponse à la question 2 ?

  6. #5
    Kan60

    Re : Southern blot et séquençage - Interprétation

    Bonsoir,

    J'ai également besoin d'aide sur cet exercice, pourquoi avoir utilisé le brin matrice pour apres repérer le site de coupure de l'enzyme de restriction, n'est il pas possible de le faire avec le brin neosynthétiser ?

  7. A voir en vidéo sur Futura
  8. #6
    Kan60

    Re : Southern blot et séquençage - Interprétation

    Voici les differents document que l'auteur n'a pas pu mettre.
    Images attachées Images attachées

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