comment fonctionne un séquençage d'ADN ?

[invite026e48c4]

Bonjour,
Je suis nouvelle sur le forum et déjà accro ! Je parcours les anciens sujets les yeux pétillants et la curiosité me démange.
J'ai peu de connaissances sur l'ADN, si ce n'est que son nom entier est acide désoxyribonucléique, que la séquence de nucléotide détermine un certain caractère, qu'un nucléotide est composé d'une base azotée, un groupement phosphate et un sucre, le désoxyribose et ces nucléotides sont complémentaires.
Cependant, des tas de termes restent inconnus sur le sujet, les histones ? les allèles ? le séquençage ?
Ainsi, je viens vous demander comment se déroule le séquençage d'ADN? Je me doute qu'il doit exister plusieurs méthodes, dont certaines évoluées ou modifiées par des technologies plus avancées.. Quels sont leurs noms ? Leurs technologies ? Comment peut on retranscrire une séquence de nucléotide en un caractère ?
Enfin bref, comment fonctionne un séquençage d'ADN ?
Merci d'avance à ceux qui perdrons du temps à me répondre,
et désolé de vous avoir fait perdre ce temps
-----

[invite2e21fee6]

Bonjour,
La méthode de base est appelée le séquençage de Sanger, je pense que son fonctionnement risque de te paraitre fort complexe au vu de tes précédentes questions. Ce n'est pas grave car nous sommes maintenant aux séquençages de seconde (et troisième) génération qui sont au final plus facile à comprendre.

Il existe plusieurs méthodes mais le ion-torrent est la plus facile à comprendre je pense (et la moins chère et plus rapide des nouvelles méthodes) :
Un séquençage se fait sur un seul des deux brins de l'ADN. On fixe le brin à séquencer sur une microbille. Le brin est répliqué jusqu'à avoir plusieurs centaines de copies de ce brin sur la microbille. Ensuite les bases azotées sont présentées à la microbilles les unes après les autres : ATCG. Les bases vont s'ajouter les unes après les autres par complémentarité au brin attaché à la bille. Dès qu'une base est fixée, une variation de pH est mesurée.
En bref : on présente de l'adénine... si le pH ne bouge pas, on passe à la suivante : on présente une thymine : si le pH bouge, la première nucléotide complémentaire au brin est une thymine. On valide la première nucléotide et on passe à la suivante. Il "suffit" de présenter chaque base en mesurant le pH et ce jusqu'à la synthèse complète du brin complémentaire.

J'espère que mon explication est suffisante sinon n'hésite pas, je chercherai des vidéos et images

[invite026e48c4]

Merci beaucoup pour ton message !
Je n'ai pas tellement compris ce qu'il se passe lorsque le pH bouge.
Comment identifie-t-on un gène par la suite ?
(Hors sujet mais ça m'intrigue, est-ce que ton pseudo est issu de la musique de Jethro Tull "Aqualung" ? Parce que ça mériterait une médaille)

[invite2e21fee6]

Désolé de te décevoir mon pseudo vient de la chanson de Morcheeba et de la chanteuse Aude Feuillerat .
Ici la variation de pH est simplement le signal qui montre qu'une nucléotide s'est accrochée. Il suffit de voir si le pH change avec A, ou T ou C ou G pour savoir quelle est la bonne nucléotide.

Pour l'identification des gènes cela vient après le séquençage. Il est possible de repérer des séquences d'ADN spécifiques aux gènes (séquence d'initiation, séquence de terminaison...)

[A voir en vidéo sur Futura]