Test eliza

[meriampharm]

Bonjour tout le monde, j'ai vraiment besoin d'aide si quelqu'un parmi vous pourrait m’éclaircir
voila, on veut faire un Dosage de sérum Albumine Bovine par ELIZA
pour la première étape
on a 200µl du SAB dans le C1 et 100µl dans les puits C2 à C6
on reprend 100µl de SAB du puits C1 et on le met dans le puits C2 apres homogénéisation on preleve 100 µl du puit C2 et on le met dans le puits C3 et ainsi de suite....et on jete à la poubelle les 100µl derniers (puit C6) comme ca il en restera 100µl dans chaque puits..... là je comprend qu'on fait la dilution du SAB ,1/2 puis 1/4 puis 1/8 puis 1/16 puis 1/32 en fin je pense....apres ca on dépose 100µl du SAB dans le puits A11 et B11 et 100µl de PBS A12 B12
apres avoir rempli les puits utiles on laisse adsorber pour 50 min a 37°
apres lavage on procedera à la deuxieme etape avec la reaction specifique anti SAB, là on incubera pour 30 min
mes questions sont les suivantes :
pourquoi on fait la dilution
pourquoi on incube pour 50 min et 30 min ( je souhaiterais qu'on me justifie ces temps ) pourquoi cette difference !!
à quoi servent les puits A11/B11 et A12/B12
beaucoup de question je sais , y aurait il une personne qui pourrait m aider s'il vous plait !! c est urgent !!
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[Flyingbike]

Vous êtes sur de l'énoncé ?

on a 200µl du SAB dans le C1 et 100µl dans les puits C2 à C6
on reprend 100µl de SAB du puits C1 et on le met dans le puits C2 apres homogénéisation on preleve 100 µl du puit C2 et on le met dans le puits C3 et ainsi de suite....et on jete à la poubelle les 100µl derniers (puit C6) comme ca il en restera 100µl dans chaque puits..... là je comprend qu'on fait la dilution du SAB ,1/2 puis 1/4 puis 1/8 puis 1/16 puis 1/32 en fin je pense....apres ca on dépose 100µl du SAB dans le puits A11 et B11 et 100µl de PBS A12 B12

si c'est de la BSA que vous mettez partout, on ne dilue rien ! Dans C2 a C6 c'est plutôt du PBS, non ?


vous êtes sur que c'est un dosage de BSA ?


Pour les temps, c'est un peu arbitraire, un peu expérimental. On pourrait faire l'inverse, ça fonctionnerait aussi.

A11, aucune idée, a priori c'est la même chose que dans C1
B11, c'est un puits sans protéine, il sert a faire un "blanc" pour la lecture du signal

pour la dilution, c'est pour faire une gamme et avoir une corrélation entre l'absorbance obtenue et la quantité de protéine. C'est une référence qui permet de déduire la concentration dans les échantillons inconnus à partir de leur absorbance

[meriampharm]

merci beaucoup pour votre réponse !!
oui je suis sure de l'énoncé
On a mis 200µg/ml SAB dans le puits C1 puis 100µg/ml du PBS dans les puits C2 à C6
puis on a repris 100µg/ml du puits C1 cad 100µg/ml du SAB et on les a deposé dans le puits C2 et apres homogénéisation on a repris 100 du puits C2 puis le mettre dans le puits C3 et ainsi de suite donc à chaque fois il en reste 100µg/ml dans le puits
et dans le A11 et B11 on a mis 100µl/ml du SAB
et du PBS en A12 et B12
je pense que pour la première étape où on a mélange le SAB et le PBS et incuber pour 50 min était pour bien fixé l'antigene qui est le SAB au fond du puit ... le PBS va etre un bloquant dans (il va aider le SAB à se fixer sur le fond de la plaque de microtitration )... vous en dites quoi !?
et pour les 4 puits de A11 à B12 , ils doivent pas tous servir d'un blanc pour la lecture du signal ?? .....mais je pense pas parce que surement le A11 et B11 vont servir de qlqch et A12 et B12 d autre chose