Bonjour, j'essaie de comprendre la PCR depuis quelques jours.
J'ai bien compris que pour polymériser une chaîne d'un brin par complémentarité on a besoin d'une amorce qui s'hybride avec l'autre brin et que pour créer cette amorce, il est nécessaire de connaître les séquences des extrémités de la région d'ADN à amplifier. Ce que j'aimerai savoir c'est : quelle processus nous permet de connaitre cette séquence? cette question est aussi valable pour le séquençage.
c'est une bonne question. Pour utiliser cette technique de PCR il faut déjà connaître la séquence à amplifier. En fait la PCR permet d'une part de vérifier qu'on a bien la séquence en question, mais surtout permet d'amplifier des séquences qui ont quelques mutations par rapport à la séquence connue. On peut ensuite séquencer l'amplicon obtenu, alors qu'on ne pourrait pas (du moins on ne pouvait pas jusqu'à récemment) séquencer l'ADN avant amplification.
Dernière modification par MissJenny ; 25/08/2021 à 16h03.
Bonjour,
En effet pour créer des amorces de PCR, il faut connaitre la séquence de la portion d'ADN cible, ou a minima la séquence des endroit où on va positionner les amorces.
Concernant le séquençage, il est possible d'utiliser des amorces appelés random hexamer qui sont un mélange de chaines de 6 nucléotides assemblés au hasard et qui vont permettre d'initier une synthèse d'ADN complémentaire.
