plasmide

[invitebd471e86]

Bonjour tout le monde, j'ai mes examens dans deux semaines, donc pour m'entrainer je fais des annales, cependant je n'ai pas les corrections de toutes mes annales. Et cela me pose tout particulièrement problème pour cet exercice auquel je ne sais vraiment pas quoi répondre.

Le plasmide représenté ci-dessous a été digéré avec une enzyme de restriction PstI. Un fragment d’ADN d’intérêt a été inséré dans ce plasmide après digestion avec la même enzyme. Le plasmide contenant l’insert a été ensuite utilisé pour transformer des cellules de E. coli.
Les rendements de la transformation étant généralement faibles, quelles conditions de culture allez-vous appliquer pour sélectionner les colonies qui contiennent l’insert ? Justifiez votre réponse

ampR : gène de résistance à l’ampicilline
tet R : gène de résistance à la tétracycline

Merci d'avance pour votre aide
-----

[Edelweiss68]

Bonjour,

Les exercices se postent dans le forum "exercices en biologie".

Si vous recherchez de l'aide et des conseils pour vos exercices, merci de poster votre message dans le forum adéquat : http://forums.futura-sciences.com/exercices-biologie/

[invite44594c28]

Regarde bien la carte du plasmide, dans ton énoncé il est dit qu'on a utilisé PstI, le site PstI se trouve sur le gène ampR.
Que se passe-t-il quand on insert un ADN étrangé dans le gène ampR?

[invitebd471e86]

Je pense que si l'on insert un ADN étranger dans un gène cela le rend inactif, les colonies qui contiendrons l'insert ne seront donc plus résistante à l’ampicilline.
Mais dans ce cas la, si on utilise un milieu de culture contenant de l'amplicilline, les colonies qui contiennent l’insert seront dégradés non ?

[A voir en vidéo sur Futura]

[inviteb5f741f3]

C'est justement cela l'intérêt. Celles qui meurent sont celles recherchées.
Il faut que tu réalise ce que l'on appelle une contre-épreuve. Tu fais un "double" de ton milieu (une photocopie mais invivo).
Tu peux appliquer sur ton milieu de culture une feuille de papier. Tu auras des "taches" sur cette feuilles qui correspondrons spatialement aux "taches" de tes colonies bactérienne.

Si j'ai bien compris la question le principe est celui-là!

[invite44594c28]

Je pense que si l'on insert un ADN étranger dans un gène cela le rend inactif, les colonies qui contiendrons l'insert ne seront donc plus résistante à l’ampicilline.
Mais dans ce cas la, si on utilise un milieu de culture contenant de l'amplicilline, les colonies qui contiennent l’insert seront dégradés non ?

Oui, les bactéries ayant reçut l'ADN seront ampS. Mais sur ton plasmide il y a aussi un gène tet R. Donc si tu fais ta culture sur une gélose contenant de la tétracycline... ?

[invitebd471e86]

si on utilise une gelose qui contient de la tétracycline, toutes les colonies resterons intactes, étant donné qu'avec ou sans l'insert elles possèdent toutes un gène de résistance a la tétracycline

[invite44594c28]

Je trouve ton sujet assez bizarre. Techniquement il suffit seulement de faire pousser sur tétracycline. Si les bactéries poussent c'est qu'elles sont transformés.