Bonjour, j'ai pour la préparation d'un examen à répondre à cet exercice. Je comprends la démarche, mais je n'arrive pas à interpréter les résultats. J'espère que vous pourrez m'aider:
Vous souhaitez connaître l’impact d’une molécule X sur le taux de
mutation chez Escherichia coli. Pour cela vous décidez de réaliser deux
cultures liquides en parallèle inoculées avec la même souche de départ
mais contenant pour l’une la molécule X, pour l’autre rien. Après
croissance des bactéries jusqu’en phase stationnaire, vous souhaitez
mesurer et comparer les fréquences d’apparition de bactéries mutantes
résistantes à un antibiotique, la kanamycine, selon que les bactéries se
sont développées en présence ou en absence de la molécule X. Vous savez
qu’une culture liquide d’E. coli en phase stationnaire compte
approximativement 1.108 bactéries/ml et que la fréquence d’apparition
spontanée de mutant résistant à la kanamycine se situe autour (très
approximativement) de 10-6 (1 bactérie résistante à la kanamycine pour
106 bactéries totales).
Question - Quels étalements vous semblent appropriés pour réaliser vos
comptages (environ 100 colonies par boîte après croissance) ?
Question : De manière surprenante après étalement, vous obtenez un tapis
bactérien sur l'ensemble des boîtes contenant de la kanamycine,
quelle(s) hypothèse(s) permet(tent) d'expliquer le résultat?
Dans une expérience similaire vue au cours, on effectue les dillutions de 10-4 et 10-5 d'une solution sans molécule mutagène, on en prélève à chacune 100µl qui sont étalées. Aucune dillution n'est effectuée pour l'autre, mais de 1000µl on prend 100µl qu'on étale directement, ensuite 900µl qui restent sont centrifugés, redillués dans 1ml et réétalés. Je ne comprend pas vraiment l'interêt de ces dillutions.
On nous explique ensuite que ce qu'on devrait obtenir est un graphe montrant l'effet de la molécule: augmentation de mutant en fonction de la concentration de molécule mutagène. Ce n'est pas ce qu'on observe, mais aucune raison ne nous est donnée.
La seule réponse que je puisse trouver est que la molécule n'a pas d'effet mutagène. Mais je doute que cela soit suffisant!
Merci beaucoup....
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