slt ...
j'ai pas une question! plutot une demande!!! je ne sait pas si quelqu'un pourra m'envoyer un document complet concernant l'extraction de l'ADN, avec le principe de chaque étape, pourquoi chloroforme ? pourquoi phenol ?...
merci d'avance
merci de ne pas mettre d'email sur le forum. Yoyo
Dernière modification par Yoyo ; 10/10/2006 à 18h09.
L'extraction d'ADN est au programme au lycée en seconde, et c'est une manip qui est faite à la fac donc si dans google tu tapes "TP extraction ADN" tu devrais trouver ce que tu veux.
Salut!
Quand tu as ta sauce d'ADN, tu utilises un alcool (style éthanol) pour précipiter ton ADN (car l'éthanol est hydrophobe). Tu utilises ensuite des ions chargés positivement (NH3+, ...) pour rapprocher les différentes molécules d'ADN (qui sont chargée - à cause de leurs phosphates) et ça permet le regroupement des ADN entre eux, ceux qui les rend visibles... On peut aussi rajouter un "carrier" (en général du glycogène)...
A+
Vinc
Primum non nocere.
Merci...
mais ce que Je cherche c'est un document détaillé de la chose, avec les protocoles mais surtout les principes de chaque étape … j’ai un tas de documents tiré via divers moteurs de recherche… mais aucun ni complet, soit il n’y a que le protocole, soit on ne parle que de certains aspects de la manipe…
Merci Qmêm @+
Tout dépend pour quoi tu veux réaliser une extraction d'ADN. Je vais essayer de l'expliquer dans le cadre d'une extraction d'ADN pour les bactéries.
- Il faut d'abord lyser les cellules et géneralement c'est du SDS qui est utilisé. Il va permettre de solubiliser les membranes et de libérer le contenu cellulaire.
Une fois l'action du SDS, il faut separer l'ADN des protéines et autres organites.
- Pour cela, il faut utiliser du phenol pH8 ou 4 (je ne sais plus... l'un est utilisé pour l'extraction d'ARN et l'autre pour l'extraction d'ADN).
- Après avoir placé le melange contenu cellulaire/phenol, il faut agiter afin que l'ADN puisse se retrouver dans la phase aqueuse que l'on recupère après avoir centrifugé. 2 phases sont visibles: la phase aqueuse au dessus contenant l'ADN, la phase organique contenant l'ARN et l'interphase contenant les protéines.
- Une fois la phase aqueuse récuperée on ajoute du chloroforme qui permet d'eliminer les impurétés encore présentes.
-Suite à une centrifugation, il faut récupérer la phase supérieure.
Pour l'extraction d'ADN, ça s'arrete là mais cette étape est suivie par une concentration de l'ADN obtenu.
En bref, il faut precipiter l'ADN avec de l'Acetate de Sodium et de l'Ethanol 70% par agitation puis centrifugation. Il faut eliminer tout l'ethanol puis nettoyer le culot avec de l'Ethanol 100%. Apres une nouvelle centrifugation, l'Ethanol est eliminé et le culot d'ADN seché puis remis en suspension dans un tampon. Il peut etre conservé à 4°C s'il est circulaire ou à -20°C s'il est linéaire.
Merci encore une fois …
Mais comme j’ai déjà dit j’ai un tas de documents qui traite un peut le sujet … mois se que je cherche c’est bibliographie bien détailler, qui décrit de largement les principes de chaque étape …
Mais bon merci Qmem
