dosage immunologique

[invite947abf84]

bonjour,

Je vais etre ammené a utiliser cette technique dans le cadre de mon travail mais je ne sais pas exactement comment ça marche. Est ce quelqu'un pourrai m'expliquer de manière simple le principe général de fonctionnement, le mode de détection et la sensibilité de ce genre de techniques (par exemple pour les tests de grossesse ou de depistage de certains virus effectués en hôpitaux...).
Quelle sont les étapes lors de l'utilisation d'un tel type de test (préparation des test films, dépôts des échantillons biologiques, révelation...)

Un grand merci d'avance à ceux qui auront le courage de répondre à un novice dans ce dommaine !

Polyclonal
-----

[invite9eab997a]

Salut,
tu as 2 types de dosage ELISA.
Dans le premier cas, tu coates tes puits avec un anticorps dirigés contre la substance à détecter, par exemple anti IL2. Ensuite tu incubes ton échantillon (sérum, surnageant de culture,...) et tu révèles avec un deuxième anticorps couplés à une enzyme. Cette enzyme ve dégrader son substrat qui a été choisi pour changer de couleur lorsqu'il est hydrolysé. Il suffit alors de mesurer la DO et de calculer la concentration de tes echantillons avec la gamme étalon. La sensibilité de certains tests va jusqu'au pg/mL.
Dans un deuxième cas, tu peux aussi détecter des anticorps. Dans ce cas, tu coates ta plaque avec la cible de ces anticorps, par ex une protéine virale.
Tu incubes ensuite ton échantillon et tu révèles de la même façon que dans le premier cas avecdes anticorps anti-anticorps.

[invite947abf84]

Wouah... quel efficacité !
Merci beaucoup Biocell ! C'était très clair.

Je permets donc juste une dernière question, plus pratique: Il y a donc au moins deux étapes avant la révelation (1/ incubation de l'échantillon biologique à tester et 2/ dépôt du 2ème anticorps couplé à l'enzyme). mais en pratique lorsqu'une femme fait un test de grossesse par exemple, elle ne dépose que de l'urine sur le test et pas d'anticorps secondaire couplés avec une enzyme, donc comment se fait la détection pour ce genre de test fait "à la maison" ??

J'espère que ma question était claire...

Merci d'avance
Polyclonal

[invite9eab997a]

Wouah... quel efficacité !
Merci beaucoup Biocell ! C'était très clair.

lorsqu'une femme fait un test de grossesse par exemple, elle ne dépose que de l'urine sur le test et pas d'anticorps secondaire couplés avec une enzyme, donc comment se fait la détection pour ce genre de test fait "à la maison" ??

J'espère que ma question était claire...

Merci d'avance
Polyclonal

Dans le cas des tests de grossesse, les anticorps anti HCG sont couplés à une molécule colorée. Ces anticorps sont libres et sont présents dans la tige du test qui sera mise en contact avec l'urine. Dans ce cas, le liquide remonte par capillarité, entrainant les anticorps.
A un certain niveau du test, il y a d'autres anticorps antiHCG (dirigés contre un autre épitope). Ces anticorps sont eux fixés sur une matrice. Ils vont réagir avec le deuxième épitope de la HCG et cette interaction est plus forte que la force de capillarité. Les anticorps colorés vont donc etre stoppés et s'accumuler dans une meme zone. Une bande bleue apparait: test positif.
Si il n'y a pas d'HCG, les anticorps continuent de remonter: pas de bande bleue.

[A voir en vidéo sur Futura]

[invite947abf84]

Ok, Merci beaucoup... C'est parfaitement clair et ça m'a pas mal eclaircit sur la question !
Si tu as besoin de renseignement dans le domaine de la chimie (et organique en particulier)... fais moi signe !

Polyclonal