glycine

[inviteec077029]

Bonjour,
une petite question:
Quel est le rôle de la glycine dans le tampon de migration pour SDS-PAGE?
J'ai regardé dans plusieurs papiers mais je trouve pas le rôle précis.

Merci
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[Vinc]

Salut!
Tout est basé sur le pH dans lequel tu as tes ions glycinate.
Dans le staking, la vitesse des ions glycinates est faible car le pH est à environ 6.8, ce qui est proche du pHi des ions glycinates : ils seront donc faiblement chargés et migreront lentement alors que les protéines et les ions chlorures migrent rapidement. Mais il n'est pas possible que différents ions puissent se séparer car cela formerait un vide d'ions qui se traduirait par une rupture de courant électrique que l'on ne constate pas. Donc dans le staking, la seule possibilité est que la frontière entre les ions lents (glycinates) et les ions rapides (chlorure) se déplace tout en continuant à séparer les 2 phases. Les deux espèces ioniques migrent donc à la même vitesse.

Dans le gel de resolving, la vitesse de migration des ions glycinates augmente dans le gel de séparation, car le pH du gel de séparation est de 8.8, donc les protéines sont moins rapides que les ions porteurs. Les protéines se font dépasser par les ions glycinates et les différents complexes protéines-SDS se séparent grâce aux pores du gel.

V.

[invited07f1424]

Vinc à tout a fait raison. Et l'idée de séparé des prot grace à la glycine et aux changements de ph est digne d'un Nobel (tout comme la PCR et le sequencage) On y pense pas souvent, mais c'est vrai.
Pour la petite histoire, le papier en bio le plus cité est celui qui décrit pour la première fois la technique du SDS-PAGE. (Et c'est d'ailleurs la ref qui conseil de couler le gel la veille)
Sur ce

[Vinc]

Pour la petite histoire, le papier en bio le plus cité est celui qui décrit pour la première fois la technique du SDS-PAGE. (Et c'est d'ailleurs la ref qui conseil de couler le gel la veille)

......

[A voir en vidéo sur Futura]

[gorben]

Salut,

Si le papier "SDS-PAGE" est tant cite c'est surtout parce que le tampon de depot des proteines dans un gel (quel qu'il soit) est le "tampon laemmli". Les articles citent en fait la composition du tampon, plus que la methode de SDS-PAGE

A+

[invited07f1424]

J'ai retrouvé la ref
Laemmli, U. K. (1970) "Cleavage of structural proteins during the assembly of the head of bacteriophage T4" Nature 227, 680 - 685
Il y a 37 ans. Le pire, c'est qu'il tien toujours un labo en Suisse.