Transcription inverse et adn polymerase

[invitee06ce333]

Bonjour,
Voilà une petite question de biologie moleculaire, à propos de la reverse transcription.
On part d'un arnm puis grace à une transcriptase inverse un oligo DT et des dNTP on synthetise l'adn complémentaire. Ensuite avec de la soude on dénature le brin d'arnm pour n'avoir plus que celui d'adn! Enfin on utilise une adn terminase et des dCTP puis un mélange oligo dG D'ADN POL 1 et de dNTP. Voilà mon problème est l'utlisation de l'adn polymerase 1 pour la synthese du brin complementaire de l'adnc qu'on a obtenu. En effet, cette polymerase est pour moi plutôt faite pour enlever les amorces(chez un procaryote) d'ARN et pour faire de la réparation. Alors qu'il me semble que c'est l'adn pol3 qui est beaucoup plus rapide et fiable pour faire ce genre de syntherse et c'est d'ailleurs elle qui a le role de replicase chez le procaryote
voilà j'espere que vous avez compris ma question
merci
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[jmbowie]

Bonjour,
Voilà une petite question de biologie moleculaire, à propos de la reverse transcription.
On part d'un arnm puis grace à une transcriptase inverse un oligo DT et des dNTP on synthetise l'adn complémentaire. Ensuite avec de la soude on dénature le brin d'arnm pour n'avoir plus que celui d'adn! Enfin on utilise une adn terminase et des dCTP puis un mélange oligo dG D'ADN POL 1 et de dNTP. Voilà mon problème est l'utlisation de l'adn polymerase 1 pour la synthese du brin complementaire de l'adnc qu'on a obtenu. En effet, cette polymerase est pour moi plutôt faite pour enlever les amorces(chez un procaryote) d'ARN et pour faire de la réparation. Alors qu'il me semble que c'est l'adn pol3 qui est beaucoup plus rapide et fiable pour faire ce genre de syntherse et c'est d'ailleurs elle qui a le role de replicase chez le procaryote
voilà j'espere que vous avez compris ma question
merci

ADN polymérase I est certe impliquée dans l'élimination des fragments d'ARN pendant la réplication mais elle possède aussi l'activité ADN polymérase donc elle est tout indiquée.
Ceci dit, il est tout à fait possible d'amplifier un produit d'ADNc par PCR directement avec 2 amorces sans passer par l'étape de la synthèse du brin complémentaire: dans un premier temps, une seule amorce pourra s'apparier sur l'ADNc (simple-brin) et l'élongation à partir de cette amorce va générer la synthèse du site pour l'autre amorce, ce qui permet ensuite l'amplification comme à partir d'une matrice db.

[MaliciaR]

Salut,
Juste pour vérification : tu décris le kit RA, non?

Cordialement,

[invitee06ce333]

Moi je parle de transcription inverse mais ej sais pas si la question m'est adressée. Ce qui me paraissait bizare c'était qu'on utlise cette polimerase 1 alors que la 3 est environ 15 foi splus rapide

[A voir en vidéo sur Futura]

[Yoyo]

Moi je parle de transcription inverse mais ej sais pas si la question m'est adressée. Ce qui me paraissait bizare c'était qu'on utlise cette polimerase 1 alors que la 3 est environ 15 foi splus rapide

Oui mais il faut voir qu'apres faut voir la quelle est la plus simple à purifier, si il y a plusieurs sous-unité ca deviens plus complexe.
sans compter qu'en general ce sont des proteines accessoires qui conferent a la polymerase sa processivite et sa fidélité

Yoyo

[invitee06ce333]

Ah d'accord! J'ai une autre petite question toujours à propos de l'adn polymerase. Est ce qu'on peut utiliser toute la "machinerie de replication" des procaryotes chez les eucararyotes(en labo) . PAr exemple mettre une cellule humaine en présence d'une adn polymerase 1/2/3 et d'une primase avec aussi des dNTP et quelques NTP (pour la primase) et tout le reste . ET obtenir une réplication de l'adn humain.?