bonjour j'ai un petit pb pr un exo
on me parle d'une souche de levure DC1 se distinguant de la souche de reference par son incapacité a croitre sur lanosterol alors qu'elle peut pousser sur ergosterol. (le lanosterol apres plusieurs reaction donne de l'ergosterol en produit final)
on veut cloner la forme fonctionnelle de ce gene defectueux ds un plasmide YCp50 pr l'inserer ds ces levures DC1.
une fois que la souche a été transformé, on a recupéré 5000 clones sur milieu minimum+ ergosterol, puis on fait une replique sur MM+lanosterol et ça a permis a 2 clones de pousser.
la question c'est "qu'a t'on selectionné a chaque étape?"
ms moi je comprend pas a quoi sert la 1ere etape. pourquoi on passe pas directement a la 2eme, càd a la culture sur MM + lanosterol histoire de selectionner directement les clones recombinés???
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Envoyé par Clote 
). C'est bien d'avoir 5000 clones, mais comment savoir lesquels parmi eux métabolisent le lanostérol précisément grâce au plasmide, et non pas à cause d'une mutation ponctuelle, une mutation suppresseur ou que sais-je encore? En faisant une réplique sur milieu min + lano, tu peux retourner à ta boîte de 5000 et savoir lesquels précisément de tes 5000 clones métabolisent le lano grâce à la copie sauvage portée par le plasmide.