bonjour je dois préparer une extraction D'ARN de levure, j'aurai besoin de confirmation:
-après avoir delayé mes levure fraiche dans de l'eau distillé j'y ajour de la soude a 10mol/L, es ce pour faire eclater les membranes?
-ensuite on ramene se mélange a PH acide(4,5) es ce pour detruire l'ADN?
-on le met ensuite dans la glace mais la je ne vois pas pourquoi
SVP à l'aide
Bonsoir,
Pourriez-vous être un peu patiente? Vous exigez une réponse dans les 7 min suivant votre demande et en plus vous envoyez des MP aux intervenants avec demande de vous faire aider en privé, ce qui est totalement contraire à la Charte de FSG que vous avez signée en vous y inscrivant...
Merci de prendre en compte le fait que les intervenants ne participent que s'ils ont le temps/envie et ce n'est pas parce que c'est urgent pour vous que ça l'est pour nous.
Cordialement,
An expert is one who knows more and more about less and less.
Globalement tu as les réponses a tes question. L'etape dans la glace permet de préserver (en theorie) tes ARN de la degradation.Envoyé par soileil
Bon il y a des protocoles plus propres et plus efficaces
YOyo
Merci beaucoup pour cette réponse. j'en ai encore une petite.
Après ces étapes on fait une centrifugation à 3000 tours, Les ARN sont dans le surnagent (de volume V) c'est pourquoi on le récupère. Mais on y ajoute un volume V d'éthanol à 95%, es ce pour faire précipité les ARN dans le culot? je pense que oui puisqu'on le récupère.
Mais dans l'étape suivante, après une nouvelle centrifugation à 3000 tours, on remet de l'éthanol. La je ne vois pas pourquoi.
En général les acides nucléiques précipitent en présence de sel. En général on remet de l'EtOH à 70% pour éliminer une partie des sels et des autres contaminants (on parle souvent de lavage du culot).
