Extraction ARN ethanol 70%

[invite59cc5052]

Bonjour!
Je prépare des TP de biologie moleculaire à la fac, dont un sur l'extraction des ARN. Après avoir extrait l'ARN des cellules avec du TRIZOL, on obtient 2 phases, la phase organique (phase inferieure avec phénol et chloroforme) et une phase aqueuse avec les ARN. Peut on dire que les ARN sont dans la phase aqueuse parce qu'ils sont polaire?

Ensuite, il s'agit de précipiter les ARN, on incube avec de l'isopropanol, à quoi sert t'il dans la précipitation? Après centrifugation on enlève le surnageant, et on ajoute de l'ethanol a 70%. On me pose la question pourquoi 70% et non ethanol pur? J'imagine que la différence se fait au niveau de la fraction d'eau de l'ethanol 70% mais je ne sais pas quoi répondre...

Merci d'avance pour votre aide!

K.U.
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[Yoyo]

Ensuite, il s'agit de précipiter les ARN, on incube avec de l'isopropanol, à quoi sert t'il dans la précipitation?

L'isopropanol est l'acool qui va permettre a l'ARN de précipiter.

Après centrifugation on enlève le surnageant, et on ajoute de l'ethanol a 70%. On me pose la question pourquoi 70% et non ethanol pur? J'imagine que la différence se fait au niveau de la fraction d'eau de l'ethanol 70% mais je ne sais pas quoi répondre...

l'ethanol 70% sert a "laver" l'ARN c'est a dire de permettre de dissoudre certains sels qui ont été utilisés pour la précipitation.

YOyo

[invite59cc5052]

L'isopropanol est l'acool qui va permettre a l'ARN de précipiter.


l'ethanol 70% sert a "laver" l'ARN c'est a dire de permettre de dissoudre certains sels qui ont été utilisés pour la précipitation.

YOyo

Merci pour la réponse, mais un point reste un peu obscure, les ARN sont insolubles dans l'alcool, c'est pour ça qu'ils précipitent c'est ça? Et si ce que je vient de dire est juste, avec l'ethanol 70%, les ARN vont "dans l'eau" et les sels dans l'alcool??

[jmbowie]

De façon un peu plus moléculaire, l'ADN précipite car il n'est pas soluble dans l'alcool car celui-ci le déshydrate, tandis que les sels que l'on ajoute pendant l'extraction neutralisent les charges négatives de l'ADN (l'apport de charges positives permet la création de solides)

[A voir en vidéo sur Futura]

[jmbowie]

Merci pour la réponse, mais un point reste un peu obscure, les ARN sont insolubles dans l'alcool, c'est pour ça qu'ils précipitent c'est ça? Et si ce que je vient de dire est juste, avec l'ethanol 70%, les ARN vont "dans l'eau" et les sels dans l'alcool??

A 70%, il y a assez d'eau pour dissoudre les sels mais pas assez pour dissoudre (tout) l'ADN présent

[invite59cc5052]

Ok!!
Merci beaucoup pour la réponse, ca va bien mieux pour comprendre ce que je vais faire en TP!!