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Activité phosphatase alcaline

  1. luccio37

    Date d'inscription
    mai 2008
    Âge
    27
    Messages
    11

    Activité phosphatase alcaline

    Bonjour
    J'ai un petit problème en TP de biochimie sur l''influence du pH au cours de l'activité des phosphatase alcalines.
    Il demande de calculer en UI/L l'activité phosphatase alcalines du sérum avec la formule: Activité( en UI/L d'enzyme) = v * DI

    avec v en UI/L et DI dilution de l'enzymz dans le milieu d'incubation

    Mais que est v???
    auparavant il nous demander de tracer la courbe DO=f(PNP) et la courbe DO=f(PH)

    Merci d'avance


     


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  2. Mrikzik

    Date d'inscription
    janvier 2008
    Localisation
    Dijon
    Âge
    26
    Messages
    420

    Re : activité phosphatase alcaline

    Citation Envoyé par luccio37 Voir le message
    Bonjour
    J'ai un petit problème en TP de biochimie sur l''influence du pH au cours de l'activité des phosphatase alcalines.
    Il demande de calculer en UI/L l'activité phosphatase alcalines du sérum avec la formule: Activité( en UI/L d'enzyme) = v * DI

    avec v en UI/L et DI dilution de l'enzymz dans le milieu d'incubation

    Mais que est v???
    auparavant il nous demander de tracer la courbe DO=f(PNP) et la courbe DO=f(PH)

    Merci d'avance
    Salut,
    Généralement v est la vitesse de réaction en UI et pas en UI/L (normalement).
    Les UI sont des micromole de substrat consommé par minute (à vérifier quand même). On peut dire que c'est représentatif d'une quantité d'enzyme. Donc ton activité en UI/L est représentatif d'une concentration d'enzyme.
    ils ont fait comme ça (ça change pas grand chose au finale), donc pour calculer ton activité finale du sérum tu doit trouver l'activité de ton essai et prendre en compte le facteur de dilution du à la manipulation. (d'ou ta formule Activité = v * DI).

    A ton avis pourquoi t'ont-ils demandé de tracer ces courbes? (tu dois en déduire quelque chose par un calcule mais quoi?)
     

  3. luccio37

    Date d'inscription
    mai 2008
    Âge
    27
    Messages
    11

    Re : activité phosphatase alcaline

    Il demande de calculer l'activité à chaque pH
    Avec les deux courbes, on peut savoir quelle est pour chaque pH la concentration en PNP
    Mais après je ne sais pas
     

  4. Mrikzik

    Date d'inscription
    janvier 2008
    Localisation
    Dijon
    Âge
    26
    Messages
    420

    Re : Activité phosphatase alcaline

    La phosphatase alcaline catalyse la réaction de transformation de PNPP en PNP (je suppose que c'est ca ta réaction?).
    Donc si tu as ta concentration de départ en PNP et finale et que tu sais combien de temps il y a entre ces deux points tu peux déterminer la vitesse de ton enzyme. Tu me suis?

    Vous avez arrêté la réaction a un temps donné non?
     

  5. luccio37

    Date d'inscription
    mai 2008
    Âge
    27
    Messages
    11

    Re : Activité phosphatase alcaline

    On a arreté la réaction à 15 minutes
    On a pas la concentration finale en PNP
    La courbe DO=f(PNP) est la gamme d'étalonnage, on y a mis du PNP et du tampon
     


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  6. Mrikzik

    Date d'inscription
    janvier 2008
    Localisation
    Dijon
    Âge
    26
    Messages
    420

    Re : Activité phosphatase alcaline

    Et la DO elle t'indique bien quelque chose. C'est une DO de quoi? et ton coefficient d'extinction molaire?
    Tu cherche ou je fais tout a ta place?
     

  7. luccio37

    Date d'inscription
    mai 2008
    Âge
    27
    Messages
    11

    Re : Activité phosphatase alcaline

    La DO correspond à la quantité de produit formé
    je prendrais la DO en fonction du pH et je la reporterais sur la courbe d'étalonnage comme ca je pourrais savoir combien de PNP a été formé en 15 minutes donc savoir la vitesse de l'enzyme
    après il faut multiplier par la dilution de l'enzyme et on a l'activité
    C'est ca ou pas?
    merci pour toutes les réponses
     

  8. Mrikzik

    Date d'inscription
    janvier 2008
    Localisation
    Dijon
    Âge
    26
    Messages
    420

    Re : Activité phosphatase alcaline

    Citation Envoyé par luccio37 Voir le message
    La DO correspond à la quantité de produit formé
    je prendrais la DO en fonction du pH et je la reporterais sur la courbe d'étalonnage comme ca je pourrais savoir combien de PNP a été formé en 15 minutes donc savoir la vitesse de l'enzyme
    après il faut multiplier par la dilution de l'enzyme et on a l'activité
    C'est ca ou pas?
    merci pour toutes les réponses
    Voila,
    Tu prend une DO à un pH donné sur ta courbe (par exemple ta DO max). Ensuite tu regarde à quel quantité de PNP formé cela correspond.
    Après ça tu peux déterminer ta vitesse en divisant par ton temps d'incubation. Pour ton activité tu redivise par ton volume réactionnel puis tu applique le facteur de dilution.
    Bien sur tu peux condensé ça e une formule ce qui sera peut être plus clair (suivant comme tu réfléchis).
     

  9. luccio37

    Date d'inscription
    mai 2008
    Âge
    27
    Messages
    11

    Re : Activité phosphatase alcaline

    Merci pour tout
    peut être à bientot
     


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