Elisa & Ifi

[merins]

Bonjour tout le monde;



Quelle est la différence entre " l'ELISA " et " l'immuno-fluoréscence indirecte " ?




Merci d'avance
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[Zellus]

Salut,

Le principe de ces deux techniques est à peu près le même. Mais la principale différence est que l'ELISA se fait généralement dans des plaques alors que l'immunofluorescence (IF) se fait sur des cellules (immunocytochimie) ou des tissus (immunohistochimie).
Et la méthode de révélation diffère aussi :

• on utilise des anticorps (Ac) couplés à une enzyme pour l'ELISA, que l'on met en présence d'un substrat qui va être transformé en produit coloré,

• pour l'IF, les Ac sont couplés à un fluorochrome et l'observation est effectuée par microscopie à fluorescence.

Le terme indirect signifie que l'on cible l'antigène recherché avec un premier Ac, et celui-ci sera à son tour reconnu par un deuxième Ac qui porte le couplage (enzyme ou fluorochrome suivant la technique). Dans un ELISA ou une IF direct(e), l'Ac primaire porte lui-même le couplage et il n'y a pas de second Ac. L'utilisation d'un deuxième Ac (technique indirecte) permet en fait d'amplifier le signal pour détecter plus facilement l'antigène.

[Zellus]

Salut,

Le principe de ces deux techniques est à peu près le même. Mais la principale différence est que l'ELISA se fait généralement dans des plaques alors que l'immunofluorescence (IF) se fait sur des cellules (immunocytochimie) ou des tissus (immunohistochimie).
Et la méthode de révélation diffère aussi :

• on utilise des anticorps (Ac) couplés à une enzyme pour l'ELISA, que l'on met en présence d'un substrat qui va être transformé en produit coloré,

• pour l'IF, les Ac sont couplés à un fluorochrome et l'observation est effectuée par microscopie à fluorescence.

Le terme indirect signifie que l'on cible l'antigène recherché avec un premier Ac, et celui-ci sera à son tour reconnu par un deuxième Ac qui porte le couplage (enzyme ou fluorochrome suivant la technique). Dans un ELISA ou une IF direct(e), l'Ac primaire porte lui-même le couplage et il n'y a pas de second Ac. L'utilisation d'un deuxième Ac (technique indirecte) permet en fait d'amplifier le signal pour détecter plus facilement l'antigène.

[Zellus]

Oups désolé ça a buggé .

[A voir en vidéo sur Futura]

[merins]

Merci beaucoup pour la répense

pour l'ELISA si on utilise cette méthode :

on coate l'Ag, puis on ajoute le sérum (où il y a, éventuellement, l'AC), puis on ajoute l’AC conjugué à la peroxydase, puis on met le substrat TMB

dans le témoin + , le sérum ajouté contient l'AC
dans le témoin - , le sérum ajouté ne contient pas l'AC

la lecture du résultat se fait par la lecture des D.O.

questions :

est ce qu'on a un D.O. maximal pour le témoin + ?
et un D.O minimal (=0) pour le témoin - ?

et le D.O. du tube recherché nous sert-il à connaitre le titre en AC du malade?

Merci d'avance

[Zellus]

est ce qu'on a un D.O. maximal pour le témoin + ?

La DO du témoin positif n'a pas besoin d'être maximale. Il faut juste qu'il y ait un changement de coloration qui prouve qu'il y a présence de l'Ac recherché.

et un D.O minimal (=0) pour le témoin - ?

Là par contre, le témoin négatif ne possède par définition aucun Ac donc il ne doit pas y avoir de changement de couleur. La DO devrait donc être nulle oui.

et le D.O. du tube recherché nous sert-il à connaitre le titre en AC du malade?

Si tu veux doser le taux d'Ac de manière quantitative oui tu vas te servir du tube du patient. Mais il faudra faire des dilutions de ton contrôle positif pour tracer une courbe étalon à partir de laquelle tu vas déteminer le titre du malade.

PS : Juste pour le détail, on dit UNE DO car c'est l'abréviation de densité optique. Voilou .

[merins]

Salut;

Comment on peut savoir à partir des valeurs des D.O. que l'individu est malade ou non?

Est ce que cela est fait par la comparaisons avec le tube blanc ou le tube témoin négatif ?

Qu'est ce qu'on met dans le tube Blanc ?


Merci d'avance

[Zellus]

Salut,

Comment on peut savoir à partir des valeurs des D.O. que l'individu est malade ou non?

Il faut que la DO soit supérieure à celle du témoin négatif. Mais on fait la mesure plusieurs fois pour être sûr du résultat.

Est ce que cela est fait par la comparaisons avec le tube blanc ou le tube témoin négatif ?

Ben par rapport au témoin négatif comme j'ai dit . Mais il faut aussi regarder la DO du blanc qu'il faut soustraire à toutes les autres DO (positif, négatif et échantillons testés).

Qu'est ce qu'on met dans le tube Blanc ?

Dans le blanc on met tout sauf l'antigène recherché. Ca permet de vérifier si les différentes solutions qu'on dépose (anticorps, solution de révélation ...) dans les puits absorbent. Donc en fait par rapport à mon message précédent : j'ai dit que la DO du négatif devrait (et pas doit) être nulle car en fait c'est le blanc qui est nul, et le négatif peut avoir une DO légèrement supérieure à 0.

[merins]

Merci beaucoup pour la réponse

[invitedb325deb]

[QUOTE=merins;1829739]Salut;

Comment on peut savoir à partir des valeurs des D.O. que l'individu est malade ou non?

Salut !
Juste une petite précision (car les explications de zellus sont parfaitement vrai) quant à la conclusion du point de vue diagnostique : La titration de l'antigéne ou de l'anticorps donne une valeur qui sera alors comparée à une valeur seuil définie préalablement, si ton test donne une valeur supérieur alors le patient est malade si c'est inférieur alors il est sain. Le fait d'avoir la présence de l'antigéne ou de l'anticorps n'implique pas forcement la pathologie !

RMQ : ce genre de test n'est pas un dosage au sens propre puisqu'il prend en compte l'affinité de l'anticorps (et pas seulement sa concentration)....juste au casa où il est malentendu !

bye.