BET ou Bromure d'Ethidium...quelles aternatives ?

[Dizaall]

Bonjour,


Utilisant régulièrement du BET pour marquer l'ADN lors de gels d'électrophorèse, je me demandais si vous connaissiez une alternative de qualité.

Les problèmes de sécurité liés à son utilisation nous conduisent sans cesse à aborder et ré-aborder la question...mais toujours sans réponse.
Trop cher, pas assez efficace,...nous n'avons pas encore trouvé THE remplaçant.

Avez-vous déjà utilisé une autre technique de marquage, plus sûre, dans la même gamme de prix et, évidemment, pour une efficacité équivalente ?

Merci d'avance pour vos réponse,

[Zellus]

Salut,

J'ai découvert le SYBR Safe l'an dernier dans le labo où je travaille. Visiblement il est de plus en plus utilisé dans les labos pour remplacer le BET. Il a l'avantage d'être beaucoup moins dangereux que le BET, et tu le visualises grâce à une lumière bleue, donc pas d'UV pour agresser ton ADN.
Par contre, pour le prix, je ne sais pas trop. Je viens de trouver ce document qui compare les deux molécules si ça t'intéresse. Il date de 2006 donc les prix ont peut-être baissé ...

Voilou !

[doubleD]

Salut

nous aussi on est passé au syber safe depuis l'année dernière.

Par contre pour le prix que je pense que ça revient plus cher que le BET, puisque le BET que j'utilisais datait du milieu des années 90, pas d'achat depuis.

Bon à savoir, on peut utiliser le sybr safe plus dilué que ce qu'ils préconisent, ça permet d'économiser.

Un défaut je trouve, il est très photosensible. Pas question de couler des gels trop à l'avance ou de faire des allers retours avec sur la table à illumination.

Bonne journée

[Dizaall]

Merci beaucoup pour ces réponses.

Le service de sécurité nous suggère régulièrement de changer mais les responsables du labo invoquent le prix et l'efficacité pour ne pas passer à autre chose. D'autres personnes du labo ne considèrent pas le risque suffisant pour cette dépense. "Avec toutes les précautions qu'on prend..."

En dépis de toute ces précautions (isolement de la pièce, multi-couches de gants (qui n'en restent pas moins des gants classiques), etc.) j'estime tout de même que ce serait mieux de changer. D'autant plus si ce produit de substitution est tout aussi efficace. Ce qui semble être le cas selon vos témoignages.

Maintenant, il va falloir les convaincre...


Merci encore.

[Aqualung]

Oui j'ai utilisé le sbyr je suis d'accord pour sa sensibilité, il faut le protéger de la lumière durant toute la migration (si tu le mets dans le gel)

[antoine34]

Apparemment, le BET n'est pas si toxique que ça. En tout cas, pas forcément plus que ses concurrents. Mais, il reviendrais plus cher que le SYBRsafe.

source :

http://rrresearch.blogspot.com/2006/....html?spref=fb

edit : Il existe aussi le "Sight DNA Stain"

[Flyingbike]

j'utilise le GelRed, qui est plus sensible, plus résistant que le BET (micro ondable), eliminable comme déchet standard, et moins sensible au bleaching. Un peu plus cher mais utilisable a 1/20 000e sans problème

[Fanou63]

J'utilise un produit nommé EZ-Vizion de chez AMRESCO depuis peu et j'en suis super content.

C'est un tampon de charge 6X qui se stocke à 4°C. Du coup on reprends les échantillons d'ADN avec ce tampon, et on ne met rien dans le gel. On fait d'une pierre deux coups.
Le signal est bon, c'est aussi sensible que le BET. La seule différence c'est que l'intensité du signal va décroitre plus vite (dans la limite du raisonnable, ça laisse quelques heures devant soi).

Par contre il ne faut pas oublier d'en mettre dans l'échelle ! La première fois on se sent un peu...

Fanou

[kamor]

j'utilise le GelRed, qui est plus sensible, plus résistant que le BET (micro ondable), eliminable comme déchet standard, et moins sensible au bleaching. Un peu plus cher mais utilisable a 1/20 000e sans problème

C'est bizarre, mon labo est en train de le tester, et la personne qui s'en occupe nous a indiqué le contraire sur sa résistance, enfin c'était plus sa longévité, à savoir qu'après une semaine, le bain devait être obligatoirement changé. Et on continue à le traiter comme le BET. Ce que je préfère, j'ai quand même des doutes sur non nocivité d'un colorant d'acides nucléiques

[LXR]

D'après ce que j'ai entendu (...), le GelRed n'est pas moins mutagène que le BET. C'est juste qu'étant beaucoup plus sensible, on l'utilise plus dilué. C'est par ce biais qu'on peut considérer qu'il est moins mutagène, vu qu'il y en a moins.

Pour sa longévité, elle est faible je trouve. Au bout d'une journée déjà les gels se colorent mal. Dans mon labo, on le change tous les jours voire deux fois par jour quand il y a du monde qui colore (mais là ça ne vient pas de la longévité du GelRed, ça vient de sa dilution continue au fur et à mesure de la coloration des différents gels ).

[Flyingbike]

ah en post staining je dis pas, mais en préstaining il tient bien mieux que le BET je trouve.

[LXR]

Là je suis d'accord.

[julilou]

Salut,

Il me semble que de toutes les manières quel que soit le produit utilisé il s'agit d'un intercallant ADN donc par définition mutagene...

Le contact prolongé est donc dangereux. Mais avec des gants (pas en latex pour le BET puisqu'il le traverse) il n'y a pas plus de danger avec tel ou tel produit...

[kamor]

Il y a moins de danger je dirais si tout le monde fait la même chose et ça...
Dans un labo précédent, on avait une pièce BET où on était plusieurs à maniper. En vue d'une accréditation ISO 9001, on s'est tous réuni pour faire une consensus, et on s'est rendu compte qu'on enlevait les gants nitrile à des moments différents. Ce qui veut dire que potentiellement, une personne pouvait considérer un endroit propre alors qu'il avait été contaminé par un collègue, qui pourtant travaillait bien.

[noula]

Bonjour à tous, je voudrais savoir quel est le risque réel du BET (est ce que son effet cancérigène est vérifié, est ce que le simple fait de toucher une surface ou un objet ayant été en contact avec des gants contaminés au BET expose à un vrai risque??) j'ai beau chercher je ne trouve pas de réponse claire; et je commence à avoir une vraie phobie surtout que j'ai peur de contaminer mes enfants en bas âge à la maison avec des objets tel que le portable etc..
Merci de m'éclairer !!