Notion de stringence d'hybridation
Bonjour à tous,
je souhaiterais avoir quelques précisions sur la notion de stringence d'hybridation. Tout d'abord, qu'est-ce que celà signifie exactement ? Pourquoi dit-on que la stringence d'une solution augmente lorsque la concentration en sels diminue (et inversement) ?
merci d'avance pour vos réponses, et bon après-midi !
La stringence, c'est la capacité d'une solution à agir sur l'appariement d'ADN ou d'ARN pour former des doubles brins.
Plus elle est élevée, plus elle déstabilise les doubles brins. L'un des facteurs pouvant déstabiliser les appariement c'est les sels par exemple. Du coup plus la concentration est élevée plus la stringence est forte, et vice versa.
La température est aussi un facteur de stringence sur l'appariement des brins d'ADN.
Greg
Re : notion de stringence d'hybridation
Merci pour vos réponses mais il y a un souci...
Sur wikipédia, en tapant "stringence", on trouve justement l'inverse : la stringence d'une solution augmente lorsque la concentration en sels DIMINUE...
Et c'est aussi ce que nous avons vu en cours, notre prof nous l'a confirmé.
Personellement je trouvais votre version plus logique, c'est donc pour ça que j'ai posté ici.
nb : pour la température, je suis d'accord, par contre la concentration en sels pose problème...
J'me suis gouré dans mon post.
Une solution stringente est bien, par exemple, une solution à faible concentration en sels. Ce qui fait augmenter le Tm, d'où l'hybridation plus difficile (mais plus spécifique).
Re : notion de stringence d'hybridation
Ok, celà concorde avec ce qu'on m'a dit. ^^
Par contre je vois pas précisément en quoi le fait d'augmenter la Tm rend l'appariement plus difficile... Au contraire, le fait d'augmenter Tm devrait stabiliser l'ADN, et donc les appariements...?
Bonjour,
Je pense qu'il y a une erreur dans la dernière phrase de Enjoys.
Pour résumer, en conditions stingentes (température élevée, faible concentration en sels), il est plus difficile d'hybrider deux brins d'ADN. Mais utiliser des conditions plus stringentes permet, comme le disait Enjoys, d'augmenter la spécificité de l'hybridation.
Une molécule d'ADN avec un Tm élevé est plus stable en effet qu'un ADN avec un Tm faible. Par contre je tenais juste à précser qu'il n'est pas possible d'augmenter le Tm d'une molécule d'ADN vu que ce Tm dépend uniquement de la molécule considérée.Envoyé par Angmar
Re : Notion de stringence d'hybridation
D'accord Zellus, merci pour ces éclaircissements.
Toutefois (désolé), je ne trouve pas ça logique que la stringence ne varie pas dans le même sens que la concentration en sels. Pour moi, une haute concentration en sels créerait une compétition au niveau des liaisons électrostatiques réalisables avec les bases azotées, et rendrait donc les appariements plus difficiles. (en gros, les liaisons H seraient plus difficiles à faire, étant donné que les sels entrent alors en compétition avec les bases complémentaires)...
Voila, si vous pouvez m'éclairer et me dire pourquoi il n'en est rien, n'hésitez pas.
Merci d'avance !
Tout ça juste pour signaler que j'ai écrit une bêtise là, désolé.
Le Tm ne dépend pas que de la molécule étudiée (cad de sa composition et de sa taille), mais aussi notamment de la concentration en sels monovalents dans le milieu.
Donc ce que voulait dire Enjoys était juste :
Donc voilà ça c'est dit et encore désolé.
Comme tu viens de le dire, les bases s'apparient via des liaisons H, donc pas par des liaisons électrostatiques. Par conséquent les ions ne vont pas intervenir à cet endroit. En revanche, je te rappelle que les brins d'ADN sont chargés négativement vu qu'il y a des phosphates tout le long de chaque molécule. Les brins vont donc plutôt avoir tendance à se repousser. Les ions que l'on ajoute dans le milieu (comme Na+) vont permettre de neutraliser ses charges et les deux brins vont ainsi pouvoir se rapprocher plus facilement.
Désolé de ne pas avoir répondu plus rapidement, mais j'en était arrivé à cette conclusion...
En tout cas merci beaucoup pour ces précisions.
