Western blot
Bonsoir,
J'ai une question qui va sans doute paraître naïve mais tant pis alors la voilà. Dans un "Western blot" par exemple, il y a une étape après l'électrophorèse dite de "blocage" qui consiste à saturer (souvent avec de la caséine ou du BSA) les sites non spécifiques, ce que je comprends bien dans le principe. Mais, ce que je ne saisis pas c'est pourquoi la caséine/BSA ne se fixe pas AUSSI sur les sites d'intérêts ?
Merci.
Salut
Elle se fixe aussi sur les sites spécifiques, mais l'anticorps a une affinité plus grand pour ces sites et déplace donc la protéine aspécifique pour s'y fixer. Ce qui n'est pas (moins) le cas avec le sites aspécifiques.
YOyo
Génial merci!! ^^
J'ajoute une pointe de vulgarisation, plus ou moins bien faite, à toi de décider.
La nitrocellulose et le PVDF ont des propriétés chimiques leur permettant de fixer avec une haute affinité la plupart des protéines (pour ne pas dire toutes). On peut en quelque sorte les assimiler à une plaque adhésive à protéines. Lors du transfert, les protéines vont du gel vers la membrane et sont alors "scotchées" à la membrane. La membrane ne peut plus "coller" de protéines aux endroits où des protéines s'y sont déjà fixées. Il reste cependant une surface importante encore adhésive où l'anticorps, qui est une protéine, se fixera. Pour l'empêcher on incube donc la membrane en présence de protéines, ainsi elle ne pourra plus "scotcher" l'anticorps, ce sera en quelque sorte comme si du ruban adhésif avait été souillé par de la poussière : il ne colle plus. Ainsi l'anticorps n'aura plus que la protéine qu'il reconnait comme site d'interaction.
Greg
Ok merci
