Culture de cellules non adhérentes

[invite574f6443]

Bonjour,
Voila je suis en train de mettre en culture des cellules non adhérentes (en l'occurence des U937 et des lymphoblastoides qui sont des cellules lymphocytaires humaines immortalisée EBV)

Mon soucis est que c'est la rpemière fois que l'on cultive ce genre de cellules au labo et que j'ai plutot l'habitude des cellules adhérentes ou il est très simple de voir quand les cellules sont confluentes et donc bonnes à passer.

Avec ces cellules je manque de repère...
Est-ce que quelqu'un sait comment on sait que ces cellules sont bonnes à passer. (sachant qu'un difficulté supplméentaire s'ajoute a savoir que mes lympho ont la caractéristique de s'aggréger, ce qui rend l'évaluation de la quantité de cellules difficile)

Comment fait-on pour enlever les cellules mortes? En effet pour les passer il est nécessaire de les centrifuger, mais dans ce cas tout même les débris sont culotés et remis en culture donc non éliminés, et des cellule smortes en culture c'est aps terrible pour que les saines poussent dans de bonnes conditions.

Merci pour votre aide
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[invite30157012]

Salut
J'ai plutôt l'habitude également de travailler sur des cellules adhérentes mais j'ai bossé sur des lymphoblastes immortalisés pendant un stage. De ce que je me souviens, le mieux c'est que tu fasse une petite courbe de croissance au départ pour voir à quelle vitesse elles poussent, puis l'avantage pour les passer c'est que pas besoin de trypsine!... il suffit de les diluer dans du milieu neuf. Question concentration je sais plus très bien amis je pense qu'on les maintenait entre 2.10^5 et 1.10^6/ml environ. De toutes façons tu le vois aussi à la couleur du mileu quand il faut les passer. Pour les cellules mortes et les débris je ne sais pas trop, on ne fait rien de spécial en fait...
Bon courage