l'isolement des bactéries lactiques

[invite86f0f20e]

voiçi une technique pour l'isolement des bactéries lactiques antibactériennes:
l'isolement est réalisé sur milieu MRS solide"milieu adapté à la recherche spécifique des lactobacilles. les cultures sont incubées 24h à 30°C dans des boites de Petri à l'obscurité. la purification est effectuée par 4 repiquages successifs d'étalement en milieu MRS solide.
svp aidez moi pour comprendre l'objectif de cultures bactériennes à l'obscurité et de m'orienter sur la réalisation des repiquages successifs?merci d'avance
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[Jean-Luc P]

Bonjour,

La plupart des cultures sur boîte se font à l'obscurité. Pour les bactéries lactiques on préconise une incubation en anaérobiose avec atmosphère enrichie en CO₂, mais la différence n'est pas flagrante sur ce dernier paramètre.

Des indices pour tes questions:

- quels sont les types de micro-organismes capables de se développer sur MRS (est-ce un milieu sélectif) ?

- la lumière peut induire un stress oxydatif et est parfois néfaste pour des bactéries microaérophiles ou anaérobies strictes qui ne disposent pas forcément de système de détoxification adapté, en particulier dans les milieux contenant une certaine quantité de lipides (formation de radicaux libres).

[invite7249a892]

Hello;
Pour ce qui est de la mise en culture à l'obscurité, il peut s'agir d’une méthode pour crée l'anaérobiose, et il existe à ma connaissance deux méthodes qui ce font dans l’obscurité et qui s'appelle: la méthode à la bougie et la jarre à anaérobiose.
Bien sur il existe plusieurs autres méthodes pour assurer l’anaérobiose (élimination de l'O2 du milieu de culture et isolement par rapport à l'air, culture sous barbotage d'azote, culture en milieu réducteur, culture dans une enceinte en anaérobiose, méthode au pyrogallol,...).
-pour la méthode à la bougie: une anaérobiose partielle avec atmosphère enrichie en CO2 peut être facilement réalisée en utilisant un dessiccateur ou un récipient fermé dans lequel on place une bougie allumé à coté des boites de Pétri ou des tubes de milieux.
Le récipient est fermé et la bougie s'éteint au bout de quelques instant en ayant consommé de l'oxygène et libéré du gaz carbonique;
-pour ce qui est des jarres à anaérobiose: ces jarres sont des récipients à fermeture hermétique capable de contenir quelques tubes et boites de Pétri: ils sont placé dans une étuve ordinaire. Un sachet est introduit dans la jarre et son contenu est humecté par quelques ml d'eau. Les sachets contiennent du borohydrure de sodium générateur d'hydrogène et un mélange de bicarbonate de sodium de d'acide citrique générateur de CO2:il y a dégagement de H2 et CO2. Sous l'influence d'un catalyseur au palladium, l'H2 réagit avec l'O2 et l'élimine sous forme d'H2O.

Maintenant comme l'a dit Jean-Luc P, il peut aussi y avoir un stresse oxydatif due à la présence de lumière et comme les bactéries lactiques sont catalase(-), donc elle ne dispose pas d'un système de détoxification pour permettre la dégradation de certain métabolite dit toxique, comme c’est le cas de l'eau oxygénée (qui résulte de l'oxydation, par l'oxygène de l'air, des protons issus des voies d'oxydation directe).

Cordialement,
Katie.

[invite86f0f20e]

merci beaucoup Mr Jan-luc et katie pour l'explication. j'ai bien compris maintenant le principe de la technique.

[A voir en vidéo sur Futura]

[invite7249a892]

Je vous en priiiiiiiiiiie.
Bonne fin d'après midi.
Cordialement,
Katie.