Technique du quenching

[invite7b1dcabe]

Bonjour à tous,

je voudrais savoir ce qu'est, en immunologie, une phase homogène et hétérogène (quand on utilise des Ag ou AC marqués) et ce qu'est la technique du quenching (pour avoir une phase homogène ?).

Merci d'avance pour votre aide !
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[Edelweiss68]

Bonjour,

En phase hétérogène, tu as un milieu liquide et solide (exemple: technique ELISA) alors qu'en phase homogène, tu es en milieu liquide (exemple :technique EMIT).

http://www.snv.jussieu.fr/bmedia/lafont/dosages/D3.html

Pour le quenching, rien à voir avec la phase homogène, c'est dans quel contexte?

[invite7b1dcabe]

Merci pour cette réponse!
Ca me fait bien plaisir!

Pour le quenching, voilà ce que j'ai écrit dans mon cours (mais je pense, au vu de ce que j'ai écris dans cette partie du cours, que je ne comprenais pas du tout ce que le professeur disait ) :

Pour avoir une phase homogène (et maintenant je comprends que ça n'a pas de sens!), il y a la technique du quenching = extinction de la fluorescence :

fluorescence captée par l'AC. Les Ag marqués deviennent non fluo et c'est les AC qui ont formé des complexes avec les Ag qui le sont (fluo)

c'est tout ce que j'ai!

[invite7b1dcabe]

Et tant qu'à faire, même si ce n'est pas dans le titre de la discussion, sais-tu ce que l'on veut dire quand on dit que la technique des AC surnuméraires augmente la sensibilisation et la limite de détection ?

Je comprend bien que quand on utilise des AC surnuméraires dans la méthode fluoro-immunologique indirecte, cela augmente le signal de fluorescence mais je n'arrive pas à comprendre ce qu'est la sensibilisation et la limite de détection...

[A voir en vidéo sur Futura]

[inviteb4e69e1e]

Pour le quenching, voilà comment ça marche:

avec la fluorescence, je pense que tu as du voir les fluorochromes: donc, des entités qui absorbent la lumière à une certaine longueur d'onde, et qui en émet à une autre.
L'idée du quenching, c'est que à proximité du fluorochrome, tu as un autre fluorochrome qui va "absorber" la lumière émise par le premier. Pour peu que ton deuxième fluorochrome n'emette aucune lumière, il aura juste absorbé celle du premier (=quenching), et donc, tu ne verra de la fluorescence que si ton quencher est suffisamment proche du flourochrome.

Pour en revenir à ton exemple, imagine que tu as une molécule avec un fluorochrome, si ton quencher est situé sur tes ac, tu ne verra de la fluorescence que tant que les ac ne seront pas liés à la molécule.

Note que si ton deuxième fluorochrome réemet de la lumière, on parle de FRET ( à condition que les longueurs d'ondes correspondent, bien sûr), mais tu ne verra plus la première fluorescence, car le deuxième aura quand même quenché le premier.

Je suis pas sûr d'être très clair finalement

Redis moi comment...

Astro