gel 2D
bonjour mes amis
j'ai commence a faire le gel bi-dimensionnel mais a chaque fois j'obtiens des stries dans le gel qui cachent les spots, en plus la coloration au nitrate donne un fond un peu fonce. avez vous des conseils qui pourraient améliorer mes gels et merci
Salut!
Peux tu donner des précisions sur ta manip? Taille du gel? Composition? Es tu obligé d'utiliser du nitrate (problème de sensibilité?)...
Salut
Un grand merci de m'avoir répondu,
Je voudrais faire des gels 2D pour des extraits de protéines a partir de biopsies thyroïdiennes, j'ai utilisé des strips de 7cm (ph 3-10)
je fais des gels de 13%
Pour la coloration au nitrate d'argent, j'obtiens un fond du gel foncé uniquement dans la partie supérieure du gel, j'obtiens des sortes de stries qui cachent les spots, si je réduis le temps de développement des spots dans la partie inférieure ne vont pas apparaitre, sachant que j'ai fais une dialyse pour mon échantillon et c'est toujours la meme chose, le tampon d'extraction ne referme pas de tris, j'ai essaye d'éliminer toute trace de sels. est ce que c'est un problème de migration surtout la partie qui correspond a la partie centrale de la strip et c'est reproductible dans tous mes gels
au cours de la coloration j'utilise l'eau bi-distillée. j'ai essaye le bleu de coomassie colloïdal, c'est pas la mm sensibilité sachant que c'est préparé au labo (nn commercialisé)
autre chose, c'est que les extrémités des strips donnent des profils sur le gel bizarres, surtout du cote + (ou le bleu se concentre) et du marqueur du taille, ca donne naissance a des stries.
Merci infiniment pour votre aide
Bonjour,
est-il possible de joindre une image de ton gel?
Cordialement
salut
C'est vraiment le gel le plus clair que j'ai pu avoir sachant que de tres beaux gels ont été obtenus avec les memes conditions (surtt eau bidistillée) sauf l'echantilon qui différe (autre que biopsie thyroidienne).
merci pour l'aide.
