Bonjour, je suis nvelle sur le forum, et j'ai déja du posé ce message, mais impossible de me retrouver...et oui, moi et l'info, ca fait 2!!
sinon, je dois faire une synthèse sur les méthodes de détéction de l'epo...
J'ai trouvé qques publications sur lesquelles m'appuyer, mais elles sont ttes en anglais...et comme jsuis une star en anglais comme jsuis une star en info, ben j'ai pas gd chose!!
Dc si qqune pouvait m'aider...
Et je crois que tu n'est pas non plus une star du clavier...
Désolée, mais je n'y connais rien à l'epo, demande plutôt à Virenque...
pourquoi dis tu que je ne suis pas une star du clavier???
ma facon d'écrire ne te conviens pas?
Ben, normalement, on évite les abréviations et le style SMS sur ce forum. Mais je vois que tu es nouveau, peut être n'as tu pas encore lu la charte?
Ben oui, c'est la première fois que je vais sur un forum, donc je ne savais pas...Désolé!!
Maintenant, je saurai, n'empeche que je ne suis pas seul a écrire en abrégé...donc ta remanrque, tu peux la faire circuler!
Compte sur moi!!!Envoyé par ratatac
Bonjour.
Bouhhhhhhhhhhhhhhhh!
Je trouve que ce post part mal....
Les stars???Va à strarac, ici c'est sérieux, c'est pas du 'Sois belle et tais-toi!.
Continue quand-même.
Il n'y a que dans le dictionnaire où 'réussite' vient avant 'travail'.
Bonsoir.
Merci d'éviter ce genre de dialogue type "t'chat"qui n'apporte absolument rien au débat... Une question a été posée alors soit vous y répondez scientifiquement, soit vous n'avez rien à dire d'interessant et ça n'est, à ce moment là, pas la peine de polluer le topic. Je vous rapelle également, à toute fin utile, que la politesse est de mise sur Futura, merci d'en tenir compte...
La prochaine fois je ferme le fil.
Pour la modération, Vinc.
Dernière modification par Vinc ; 01/12/2005 à 17h56.
Primum non nocere.
Ecoute, moi j'attends une réponse à ma question, alors des remarques comme ca, c'est pas la peine...
c'est la première fois que je viens sur ce forum et tu es la deuxième personne a m'agresser de la sorte, c'est ca pour vous l'esprit scientifique?
vinc a tout a fait raison, tiens y compte...
il y a tout simplement la methode Elisa pour doser l'EPO.
Dois-je détailler cette méthode archi-connue ?
Le maître montre la lune
L' idiot regarde le doigt
non, pas besoin de détailler...Cependant, il existe apparemment d'autre méthodes avec le point isoélectrique ou par ionisation. Mais je ne trouve nul part d'information sur ces autres méthodes.
Salut
Le point isoélectrique permet de faire migrer la protéine selon un gradient de pH,et elle va s'immobiliser sur le gel lorsque elle atteint une charge globale nulle...C'est nottament utilisé en couplage avec une migration SDS dans les électrophorèse 2D.
Pour la ionisation, c'est assez vague, tu parles d'une chromato ionique?
Primum non nocere.
Salut vinc,
en fait, pour l'ionisation, je ne pas vraiment ce que ca peut etre. Sur une publication en anglais, il parle de "CE coupled with electrospray ionization mass spectrmometry" (CE-ESI-MS). Mais j'arrive pas à comprendre le principe.
Ha ok! je vois!
L'électrospray ionisation est un procédé utilisé dans les spectromètres de masse pour permettre d'obtenir les protéines (dont tu veux déterminer la structure 3D) sous forme gazeuse. Très brièvement, en fait tu as tes protéines dans de petite goutelettes de solution et tu vas "fragmenter" ces goutelettes de manière à obtenir (de façon statistique bien sûr) environ une molécule (=1protéine) par micro goutelette. Ensuite tu vas appliquer un fort champ électrique qui vas t'évaporer quasi instantanément le liquide dans lequel tu as ta molécule et tu vas obtenir tes protéines sous forme gazeuse...Il existe un autre système pour obtenir des protéines en phase gazeuse, c'est le MALDI (je ne me souviens plus de toutes les initiales), c'est un système différent avec une matrice organique qui piège tes protéine et un laser qui permet d'obtenir la phase gazeuse.
Bon ce qu'il faut que tu retienne c'est que cette méthode est utilisée pour faire de la spectrometrie de masse, dans le but de déterminer la structure tridimensionelle d'une protéine.
J'espère que ça t'aide un peu...
A+
Vinc
Primum non nocere.
ok! merci beaucoup pour ces informations. Ca m'a m'air un peu compliqué, mais je vais me pencher dessus..
sinon, as tu entendu parler du model CZE? c'est une électrophorèse basée sur les différences charges/masses...ce principe propose plein de méthodes ( fused-silica CE method, Coated CE method, putrescine CE method, PEI-coated capillary, polybrene-coated capillary...et j'en passe)
Bonjour a tout le monde. Aparement je vois que vous etes pas trop mal calé au sujet de l'EPO et je voudrais savoir certaines choses sur l'EPO.Par exemple je voudrais avoir des renseignements sur sa création dans l'organisme et sa façon d'agir.Ainsi que la manière naturelle je voudrais connaitre comment on arrive à la synthétiser.
J'espère que ce post retiendra votre attention et qu'il aura une réponse favorable.
Merci d'avance.
salut,
Effectivement, l' EPO ( ou érythropoïétine ) est une hormone synthétisée naturellement par les cellules du rein et elle favorise l'érythropoïese c'est à dire la synthèse des globules rouges. Ainsi, le transport de l'oxygène est augmenté et les performances physiques améliorées.
Il suffit de s'élever en altitude pour sa production soit stimulée ( c'est pour cette raison qu'avant chaque grande compétition les sportifs font un stage de préparation en montagne ).
@+
Doublej
Bonjour, moi j'étais allé dans un labo spécialisé dans les test antidopage de l'EPO, et ils m'ont dit qu'il faisaient un migrer un échantillon de plasma en éléctrophorè se sur gel de polyacrilamide, puis ajoute des anticorps radiomarqué anti EPO qui se fixent donc au niveau de l'epo. Puis, a pH acide (pour que la liaison proteine-AC soit plus faible), ils mettent une nouvelle membrane au dessus du gel (d'ou le nom du test double blotting). Dans un champ éléctrique, les anticorps migrent vers la cathode situé au dessus de la deuxieme membrane et se fixent donc sur celle ci. On révèlent leur positions ensuite avec un film radio. En fonction du lieu où ils ont migrer, on en deduis la charge éléctrique des protéine EPO. En cas de dopage, elle est differente de la charge de l'EPO "naturelle".
1) Je pense que je n'ai pas été tres clair
2) Ca doit faire trois ans que je suis allé dans ce labo, et j'avoue que mes souvenir ne sont pas tres précis, notament pour quoi la charge des molécules d'EPO est différente...
3) j'essairai de retrouver la documentation que j'avais pris à ce moment là, mais c'est pas gagné !
4) En gros pour ce qui n'aurait vraiment pas compris, c'est une sorte de western blot avec une technique un peut différente pour mettre en évidence les résultats.
A bientot (peut etre, si je retrouve mes document, pour plus de précision)
Re^^
Apres avoir retrouvé quelques document, ce n'est pas du plasma, mais de l'urine que l'ont fait migrer sur le gel au depart, puis on utilise des protéines bloquantes qui se fixent sur le gel là où il n'y a pas de protéine ( donc il y a ensuite sur le gel: Protéines urinaire, proteines bloquantes, et EPO) et c'est la qu'arrive les anticorps. La suite est juste. Pour le resultat, j'ai parlé de leurs charges, mais en réalité, on s'intéresse au pH de l'EPO: En effet l'EPO est composé d'epoiétine alpha, beta, et de darbépoiétine alpha, et d'autres composés que je n'ai pas retrouvé... En cas de dopage, il y a beaucoup d'epoiétine alpha et beta, et le pH de l'EPO aparait alors de 4,5 à 5 environ. Un individu est aussi considéré comme positif si il a un taux de darbepoiétine alpha élevé entrainant un pH de 3,1 à 4.
Malheureusement, ces "composés" de l'EPO que sont l'époiétine et le darbepoiétine, je n'ai aucune idée de ce qu'ils sont... En effet, l'EPO est une protéine et dans mes souvenirs, elle n'est composée que d'une chaine, et je ne vois donc pas ou interviennent ces "composés".
Ok ok, ca me surprend moi meme, mais j'ai tout retrouvé!
Bon alors c'est parti pour quelques précision...
Lors d'une injection d'EPO, les modification post traductionnels sont différentes de l'EPO synthétisé normalement par l'organisme. On parle d'EPO recombinante ( rHuEPO) pour l'EPO injecté, et d'EPO pour l'EPO synthétisé par l'organisme. La charge de la molécule se retrouve ainsi différente, donc la migration sur le gel est différente.
Pour le protocole, il faut d'abord faire des filtration pour concentrer l'EPO dans l'urine (EPO=34 000Da donc utilisation de membrane a seuil de coupure de 30 000Da et on récupère le retentat. Ensuite focalisation isoéléctrique sur un gradient de pH de 2 à 6. l'éléctrophorès e dure environ 30 minutes. Puis on incube la membrane avec une solution contenant des anticorps anti-EPOhumains provenant de la souris. On lave, puis on transfert les anticorps sur sur une nouvelle membrane (double blotting membrane) par electroblotting. Sur cette deuxieme membrane se trouve de l'acide acétique.
Schema (tres) simplifié:
CATHODE
DOUBLE BLOTTING MEMBRANE
BLOT MEMBRANE (ou a eu lieu l'électrophorèse)
ANODE
On fait passé un courant, les anticorps migrent sur la double blotting membrane. On incube cette membrane avec une solution d'anticorps secondaire anti immunoglobuline de souris, lavage, incubation par des peroxydases, lavage, ajout de substrat luminescent. Ce substrat est excité par les peroxydases, et se desexcite par emission de photon, détecté par une caméra ultrasensible. Ensuite, pour les résultats, c'est un peu compliqué et long à retranscrire, donc contente toi de ce qu'il y a dans le deuxieme message.
Si tu veux des précisions, n'hésite pas...
ca peut paraitre bizarre mais pour synthetiser de l epo on le fait par genie genetique c'est a dire kon pren un gene et on limplante dan une cellule or les cellule utilisé pour la synthese de l epo sont des cellule de hamster chinois.
Salut!
Non ce n'est pas si bizzare que ça! Les cellules dont tu parles sont en fait les cellules de la lignée CHO (bien connue des biologistes). C'est une lignée très fréquemment employée, entre autre car les transfections fonctionnent bien....
A+
Vinc
Primum non nocere.
est ce que vous avez des information sur la difference entre la molecule d epo de synthese et celle proguite par le corps naturellement?je sais que ca a avoir avec les charges electriques mais j'aimerai bien plus de precision.
merci
A+
En fait, pour séparer l'EPO endogène de l'EPO exogène par électrophorèse, on se base sur l'infime différence entre les propriété strucuturales de ces deux composés engendrées par leur glycosylation post-traductionnelle. En effet, une de protéine est présente dans un milieu biologique sous forme d'une "famille de molécule" de structure proche mais non identique. Ce phénomène est occasionné par les modifications post-traductionnelles effactant la protéine lors de sa synthèse. Parmi ces copies certaines possèdent des charges nettes légèrement différentes et sont séparables les unes des autres par des techniques analytiques. On dit que l'epo exogène et endogène sont des "isoformes".
Si tu veux plus de précision sur leur structures moléculaires, je peux te dire que ces deux molécules sont constituées de 165 acides aminés avec 3 N-glycosylations et 1 O-glycosymation, pour une masse moléculaire totale de 34kDa.(40% de cette masse moléculaire est due aux glycosylations). Mais il y a donc qques différences en particulier dans le nombre de résidus d'acide sialic et dans la longueur des chaines glycosylées, ce qui leur procure différents profils de migration en électrophorèse a deux dimensions. l'EPO endogène s'immobilise pour une valeur de pH entre 3.7 et 4.7 alors que le recombinant entre 4.4 et 5.1.
voila, j'espère que ca t'aidera!
merci pour le tuyau mais j'ai vu que l'epo recombinante est constituer de plus de chaine n-glycosylées que celle naturelle.tu peut m'eclairer sur la glycosylation post-traductionnelle?
merci
A+
est ce que vous pouvez m'expliquer ce qu'est la methode elisa et en quoi elle consiste?
Re : détection de l'epo?
Bonjour à tous. Je travail en ce moment sur un TPE concernant comme vous vous en doutez l'EPO, et l'explication de sa détection assez récente. Il me manque également une partie chimique dans mon TPE, ayant déjà trouvé une grande partie SVT. J'aimerai avoir vos suggestions, mais je peux également vous aider au niveau SVT.
Espérant une réponse. Merci d'avance.
j'aimerais bien aussi plus de présicion
merci
Voilà, c'est ma première visite sur ce forum .
Je suis en 1°S et fais un TPE avec deux autres élèves de ma classe sur l'EPO. Et nous aimerions faire une expèrience pour dépister la présence d'EPO dans les urines. La technique a utiliser est l'électrophorèse mais je ne trouve pas de protocoles précis indiquant les réglages concernant la manipulation de la cuve à électrophorèse pour réaliser cette expérience.
Si vous pouvez m'aider ...
