Décoloration des tissus après coloration (trichrome de masson/H&E)

[boulette45]

Bonjour,

Je réalise des peaux en 3D (derme et épiderme). Afin de les caractériser, j'ai réalisé des coupes (paraffine) et coloration H&E et au trichrome de masson. Mon problème est que ces colorations disparaissent avec le temps : quelques jours après pour mon 1er trichrome tandis que la seconde coloration au trichrome a disparu 20min après le montage entre lame et lamelle/ pour la coloration H&E, elle disparait le jour suivant.
J'ai donc fait un test de coloration H&E avec un tissu différent et la coloration disparaît également.
Je ne comprends pas l'origine de ceci.
Pourriez-vous m'aider?

Merci!
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Tu utilises quel milieu de montage? Il y en a plein de types différents et tous ne sont pas compatibles avec toutes les colorations histo.

[boulette45]

J'utilise le milieu vectashield( HT-1000) et j'ai aussi essayé avec un milieu de montage "maison" : la glycerin jelly (gélatine/eau/glycérine).
Quel milieu de montage me recommanderais-tu?
Merci beaucoup!

[random_postdoc]

Le Vectashield c'est un milieu de montage pour fluorescence, c'est pas adapté du tout je pense. En fait je suis loin d'être spécialiste de ces questions, mais je me rapelle avoir fait un peu de recherche après avoir fait une connerie du genre (monter une révélation phosphatase alkaline avec du vectashield en me disant "ca va passer" et voir tout le marquage foutre le camp )

Après avoir vite fait regardé un protocole de trichrome de masson, il y a une déshydratation dans les dernières étapes avant montage (éthanol puis xylène), donc à priori utiliser un milieu acqueux pour le montage ca va pas le faire. Tout ce que je peux te dire c'est qu'un milieu communément utilisé pour ces colorations histo est l'eukitt, tu devrais en trouver quelque part dans ton labo, ou un autre milieu de montage équivalent.

[A voir en vidéo sur Futura]

[boulette45]

merci beaucoup pour ton aide!!

[boulette45]

Une dernière petite question... l'Eukitt marche-t-il pour l'immunohistochimie par méthode colorimétrique (Ac IIaire biot+ HRP+ DAB)???
Merci beaucoup!!

[Flyingbike]

oui, les colorations visibles comme celles au DAB ne bougent pas à la déshydratation