mutagénèse classique
bonjour
on a des bactéries résistantes a la kanamycine
on veux les rendre sensible a cet antibiotique.
on irradier par les uv on respectant les paramètre de distance et de longueur d'onde.
après la mutagénèse comment peut on isoler nos souches sensibles?
merci
vous repliquez votre boite, donc vous avez deux boites identiques.
Pour cela vous utilisez une membrane que vous appliquez sur la première boite puis que vous appliquez sur une seconde.
Sur une boite vous mettez de la kanamycine dans la gelose dans l'autre pas. Les bacteries qui meurent sur la boite Kan+ sont sensibles et vous pourrez les recuperer sur la seconde boite.
Cordialement,
piwi
MERCI PIWI (technique des répliques)
je crois qu'il n'y a que cette méthode?
salut
Pour selectionner des mutations conferant un phenotypes sensibles il n'y a pas d'autre choix vu qu'il n'existe pas de selection posisitve possible.
YOyo
Ok Yoyo Thank You!
bonjour,
il y aurait peut être une autre méthode mais moins rapide :
par intégration dans les souches kanR, via la conjugaison bactérienne, d'une seconde cassette de résistance à un second antibiotique (comme la streptomycine par exemple) : souches kanR strR
Puis sélectionner les souches après irradiation : kanS strR, sur gélose+streptomycine...
je me trompe...?
@+
salut
l'apport de ta seconde cassette n'apporte rien, et vu que tu cherches a selectionner des mutants sensibles tu n'as aucun moyen de les selectionner positivement...
yoyo
pardon, je réalise maintenant ma bêtise...oups ! je ne fais que sélectionner dans ce cas les souches ayant bien reçu la seconde cassette et non les souches sensibles à la kan ...
je ferais mieux de réfléchir avant...
merci de m'avoir corrigée !
@bientôt.
Salut,
Cette question est dans le cadre d'un exo ou d'une manip??
Les mutations ponctuelles dans l'ARN 16S conferant une resistance aux aminosides sont rares et le seul moyen de selectionner un revertant t'a deja été donné.
Le plus souvent la resistance est apportée par une enzyme qui est plasmidique . Dans ce cas la, il suffit de faire une cure plamisique et tu enleves ta resistance.
Dans certains cas, des bacteries de labo ont été modifiée genetiquement et une cassette de resistance Kan a été integré dans un gene. Pour faire sauter cette cassette, tu peux soit selectionner sur un phenotype KanS soit sur le phenotype restauré du gene interrompu.
A+
salut
donc il s'agit d'un exo,et le but est d'avoir les hypothèses les plus logiques ,mais apparament c'est la seule qu'on trouvé "technique des répliques"
merci.
