La cellule mystère....

[Josquin]

Coucou. J'ai envoyé la photo à mon fréro, qui est en master de bio mol. Je le cite : "Les trucs bleus ressemblent furieusement à des noyaux colorés par la coloration de Hoechst, ou peut être plutôt une coloration de l'ADN au DAPI."
Moi je connais pas tout ça, mais je me suis dit que ca ferait peut-être avancer le schmilblick.

Josquin

[piwi]

myotube avec dapi et cy3 myosine.

[Vinc]

Salut!
On va y ariver progressivement !
Ce sont effectivement des myotubes avec noyaux colorés au DAPI mais ce n'est pas une Cyanine3 myosine! C'est un immuno marquage contre une protéine du cytosquellette mais pas une appartenant au réseau d'actine (comme la myosine). Il faut chercher parmi les filaments intermédiaires (j'en ai trop dit là! )!

Vinc

[Josquin]

Un myotube avec des noyaux... un myotube c'est comme une fibre musculaire, une cellule musculaire quoi ? Mais alors c'est fou qu'il y ait tant de noyaux si proches, non ?
Pour les filaments intermédiaires, je sais pas du tout...

[piwi]

ben pour la microscopie ca ressemble à du confocal vu que tous les champs sont nets.
Pour le filament intermédiaire c'est pas simple... vimantine? Desmine? Pour la coloration non plus c'est pas donné (rhodamine?)

M'enfin là, on va un peu à la pêche ^_^

[piwi]

Pour les myotubes qu'ils aient autant de noyaux, c'est normal.
Le myotube dérive de cellules mesenchymateuses appellées myocytes. Ces myocytes fusionnent et donnent ce que l'on appelle un syncitium. C'est à dire que c'est une cellule formée de plusieurs cellules.
On reconnait le myotube à sa forme allongée qui suggère la fibre musculaire striée finale (rhabdomycyte) et à la présence des noyaux centraux. Dans le rhabdomyocyte, l'appareil contractile va s'organiser et les noyaux seront rejetés finalement en périphérie.

[Josquin]

Pour les myotubes qu'ils aient autant de noyaux, c'est normal.
Le myotube dérive de cellules mesenchymateuses appellées myocytes. Ces myocytes fusionnent et donnent ce que l'on appelle un syncitium. C'est à dire que c'est une cellule formée de plusieurs cellules.
On reconnait le myotube à sa forme allongée qui suggère la fibre musculaire striée finale (rhabdomycyte) et à la présence des noyaux centraux. Dans le rhabdomyocyte, l'appareil contractile va s'organiser et les noyaux seront rejetés finalement en périphérie.

Donc le myotube est une cellule plurinucléée dont la différenciation ultime va donner la fibre musculaire. Merci pour ces précisions !

[Vinc]

Oui Piwi a bien résumé le truc...
Sinon pour les FI c'était la desmine avec un Ac primaire anti desmine et un Ac secondaire anti Fc couplé à la rhodamine et pour la microscoppie c'est effectivement du confocale (bravo Piwi ) !!!

Bon aller à vous maintenant (j'en ai d'autres sous la main mais c'est bien si ça tourne )!

Vinc

[Igothigh]

Salut à tous!

Excellente idée ces cellules mystères...

Je me lance puisqu'on est dans les cellules multinucléées...
(j'ai déjà donné une partie de la réponse)
Marquages? Quelles types de cellules?

A vous de jouer!

[Vinc]

Bon pour le type cellulaire je ne suis pas encore trop sûr donc je dis rien....
Pour le marquage, je dirai actine en vert (phalloïdine), DAPI pour le DNA et pour le rouge, peut-être une protéine des points focaux (avec marquage Ac couplé à la rhodamine) mais pas sûr...

[piwi]

Pas evident du tout ce chose....
Là comme ca j'aurais bien dit un polynucléaire neutrophile pour le noyau polylobulé en haut à gauche qui envoit un prolongement à la rencontre d'une autre cellule en bas à droite). Immuno-fluo contre de l'actine puis contre de la tubuline (microtubule) et la fusion des deux images actine en rouge (Cy3, rhodamine?) et microtubules en vert (FITC?) Noyau en dapi.
encore du confocal.

Sans grande conviction....

[piwi]

pour l'actine ca n'est pas necessairement une immuno d'ailleurs ca peut etre une coloration à la phalloidine-rhodamine. (forte affinité pour l'actine F)

[Vinc]

Microtubule en vert ça m'étonnerait car le réseau ressemble vraiment à celui d'actine. En général les microtubules sont bien séparés, ne se croisent pas, leur diamètre est plus important et il n'y en peut être pas autant.... Le marquage en vert ressemble vraiment à la "cage d'actine"...
Actine en rouge c'est pareil ca m'étonnerai... Surtout que l'on voit clairement des petits points rouges au niveau des bords de la cellule, et la majorité de la coloration rouge n'est pas à l'intérieur mais sur le bord, non ça me fait vraiment penser à des points focaux (alpha actinine?, Arp2/3?, cdc42?, ....), et le bord rouge me semble être un lamellipode (d'où les points focaux qui tirent tout le monde vers l'avant).
Pour le polynucléaire je pensais à ça aussi mais j'en sais trop rien.....

Mais bon je peux me tromper....

Vinc

[piwi]

mouais mais en même temps on voit bien que les trucs rouges forment de fins filaments. Bien plus fins que les trucs en vert... d'où l'idée.
2 types de filaments, les gros verts et les petits en rouge.

Maintenant j'avoue que je nage un peu. Même pour le typage j'ai des doutes. Le noyau a une drole de tronche même pour un polynucléaire...

[Vinc]

mouais mais en même temps on voit bien que les trucs rouges forment de fins filaments. Bien plus fins que les trucs en vert... d'où l'idée.
2 types de filaments, les gros verts et les petits en rouge.

Mouai..... c'est pas faux (Perceval si tu nous regardes les initiés comprendront) mais j'ai plutôt considéré que les toutes petites traces rouges filamenteuses c'était du bruit de fond parce que quand tu regardes l'image tout à gauche en noir et blanc (qui doit représenter le marquage rouge), tout le signal est quasiment répartit sur les bords (surtout sur le bout de membrane de la cellule à droite, sur la photo tout à gauche )....