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Immunologique: test du type ELISA

  1. MrGomki

    Date d'inscription
    novembre 2012
    Messages
    50

    Immunologique: test du type ELISA

    Bonjour tout le monde,

    J'aurais une question pour mon cours d'immunologie.

    Lorsque l'on fait un test immunologique, je ne comprends pas l'utilité d'utiliser 2 antigènes.
    Imaginons que je cherche la protéine "X". Et bien, je vais devoir utiliser un antigène "Ya" qui détecte la protéine "X" et c'est seulement par la suite que je mets un 2e antigène (disons "Yb") qui possède une molécule fluorescente pour qu'il se fixe sur l'antigène "Ya". Pourquoi ne pas mettre simplement l'antigène "Yb"?

    En gros, pourquoi utiliser un antigène pour détecter ma protéine et un 2e antigène pour détecter les antigènes précédemment mit ?
    Ne serait-il pas plus facile de mettre le premier antigène avec molécule fluorescente et donc on évite ainsi 2 étapes? Pourtant si on le fait c'est qu'il doit y avoir une raison, mais je ne trouve pas. ^^
    Il y a ici sur internet un schéma qui montre bien ce que je veut dire:
    http://www8.umoncton.ca/umcm-gauthie...teccompter.gif

    Je vous remercie par avance,
    Bien à vous,
    MrGomki

    -----

     


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  2. Flyingbike

    Date d'inscription
    septembre 2009
    Localisation
    Viroflay
    Âge
    32
    Messages
    4 999

    Re : Immunologique: test du type ELISA

    au lieu d'antigene vous voulez probablement dire anticorps...
    La vie trouve toujours un chemin
     

  3. MrGomki

    Date d'inscription
    novembre 2012
    Messages
    50

    Re : Immunologique: test du type ELISA

    Bonjour,

    Euh oui c'est ça, je voulais dire anticorps.

    Désolé ^-^

    Alors quelqu'un peut m'aider?
     

  4. minushabens

    Date d'inscription
    juillet 2014
    Messages
    4 985

    Re : Immunologique: test du type ELISA

    Si tu mélanges un cocktail de protéines et un anticorps fluorescent, qu'ils s'accrochent ou pas tu verras la fluorescence.
     

  5. MrGomki

    Date d'inscription
    novembre 2012
    Messages
    50

    Re : Immunologique: test du type ELISA

    Oui, mais ce que je ne comprends pas c'est pourquoi faut-il mettre un premier anticorps "A" pour repérer la protéine et un 2e anticorps "B" pour détecter l'anticorps avec la protéine.
     


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  6. vpharmaco

    Date d'inscription
    septembre 2008
    Âge
    36
    Messages
    2 109

    Re : Immunologique: test du type ELISA

    Pour continuer sur la terminologie:
    Ya = anticorps primaire
    Yb = anticoprs secondaire/

    On peut faire des ELISA directs, en marquant directement l'Ac primaire. Par contre, cela suppose que pour chaque protéine à doser, il faille developper un Ac primaire marqué (en croisant les doigts pour le marquage fluo, HRP, etc ne nuisent pas à l'affinité ou sélectivité). Si l'on veut changer de méthode de détection, il faut recommencer et produire un nouvelle Ac primaire marqué.

    C'est pour cela que le plus souvent on fait des ELISA indirect. Les Ac primaires sont optimisés pour atteindre la meilleure affinité et selectivité possibles pour leur antigène cible. Les Ac secondaires sont optimisés pour leur capacité à se lier aux Ac primaires et donner le max de signal. Ils ciblent des régions communes des Ac primaires donc un seul Ac secondaire peut être utilisé pour détecter plusieurs types d'Ac primaires. Si l'on veut passer d'un marquage fluo à un marquage chimiluminescent, il suffit de changer d'Ac secondaire.

    Il existe aussi un phénomène d'amplification: Plusieurs Ac secondaires peuvent se fixer sur un seul Ac primaire. Il en résulte un gain de signal qui améliore la sensibilité.
    Dernière modification par vpharmaco ; 13/06/2017 à 11h37.
     

  7. MrGomki

    Date d'inscription
    novembre 2012
    Messages
    50

    Re : Immunologique: test du type ELISA

    Aaaah ok!!!

    Merci beaucoup pour ta réponse!

    Bonne journée,
    MrGomki
     

  8. Flyingbike

    Date d'inscription
    septembre 2009
    Localisation
    Viroflay
    Âge
    32
    Messages
    4 999

    Re : Immunologique: test du type ELISA

    c'est pas tout à fait ça.
    Dans beaucoup d'ELISA il y'a un anticorps dit de capture qui permet de capturer la protéine d'intérêt dans le puits. Tout le reste est lavé
    Le second anticorps, de détection, permet de quantifier ce qui a été capturé.
    La vie trouve toujours un chemin
     

  9. vpharmaco

    Date d'inscription
    septembre 2008
    Âge
    36
    Messages
    2 109

    Re : Immunologique: test du type ELISA

    ah oui, j'avais çà en tête mais ce n'est peut etre pas de cela qu'il était question... https://fr.wikipedia.org/wiki/M%C3%A...SA_en_sandwich
     

  10. Flyingbike

    Date d'inscription
    septembre 2009
    Localisation
    Viroflay
    Âge
    32
    Messages
    4 999

    Re : Immunologique: test du type ELISA

    oui en effet

    l'ELISA sandwich est du coup très modulable et plutôt sensible. On n'utilise pas de secondaire au sens western blot ou IF, mais uniquement un Ac de détection biotinylé (puis streptavidine HRP) par exemple
    La vie trouve toujours un chemin
     


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