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Détermination du coefficient d'absorption

  1. Patate38

    Date d'inscription
    avril 2007
    Messages
    5

    Question Détermination du coefficient d'absorption

    Bonjour,

    Je dispose d'une solution de protéine de concentration inconnue. Je connais la masse molaire de la protéine en question, mais pas son coefficient d'adsorption et je n'ai aucun réactif me permettant de faire une gamme étalon avec de la BSA par exemple.
    J'ai réalisé divers dillution en cascade et j'ai mesuré l'absorption à 280 nm. J'ai tracé le graphe de l'absorbance en fonction des dillution.
    Existe-t'il un moyen de déterminer le coef d'absorption avec le graphe en question ? Normalement le coef correspond à la pente de la droite obtenue, mais les unités ne correspondent pas...
    Est-ce que quelqu'un aurait une solution ?

    Merci d'avance,

    Patate38.


     


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  2. HarleyApril

    Date d'inscription
    février 2007
    Messages
    13 197

    Re : Détermination du coefficient d'absorption

    1- ce coefficient se détermine usuellement au maximum d'absorption
    2- en amenant un volume connu de ta solution la plus concentrée à sec (lyophylisation par exemple) tu auras une idée de la masse présente dedans. Comme tu connais la masse molaire, le calcul de la concentration sera possible
     

  3. Patate38

    Date d'inscription
    avril 2007
    Messages
    5

    Re : Détermination du coefficient d'absorption

    Tout d'abord, merci pour ta réponse HarleyApril.
    En ce qui me concerne, la deuxième proposition n'est pas envisageable car je n'ai qu'un très faible échantillon de protéine que je ne peux pas lyophiliser car c'est pour faire de la biocristallisation (ma prot serait alors dénaturée...). Par contre pour la première proposition, il faut que j'obtienne le spectre d'absorption de ma prot c'est ça ? Par exemple je balaye entre 260 et 300nm, et ensuite je procède comment?

    Encore merci pour ta réponse,

    Patate38.
     

  4. HarleyApril

    Date d'inscription
    février 2007
    Messages
    13 197

    Re : Détermination du coefficient d'absorption

    tu balayes au plus large que te propose ton spectro

    pour la concentration, tu dois bien avoir une idée de la masse dont tu disposes dans l'échantillon s'il a été ainsi purifié
    à moins que l'activité enzymatique ou autre te permette de remonter à la concentration
     


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