Détermination du coefficient d'absorption

[invitebefeca3b]

Bonjour,

Je dispose d'une solution de protéine de concentration inconnue. Je connais la masse molaire de la protéine en question, mais pas son coefficient d'adsorption et je n'ai aucun réactif me permettant de faire une gamme étalon avec de la BSA par exemple.
J'ai réalisé divers dillution en cascade et j'ai mesuré l'absorption à 280 nm. J'ai tracé le graphe de l'absorbance en fonction des dillution.
Existe-t'il un moyen de déterminer le coef d'absorption avec le graphe en question ? Normalement le coef correspond à la pente de la droite obtenue, mais les unités ne correspondent pas...
Est-ce que quelqu'un aurait une solution ?

Merci d'avance,

Patate38.
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[HarleyApril]

1- ce coefficient se détermine usuellement au maximum d'absorption
2- en amenant un volume connu de ta solution la plus concentrée à sec (lyophylisation par exemple) tu auras une idée de la masse présente dedans. Comme tu connais la masse molaire, le calcul de la concentration sera possible

[invitebefeca3b]

Tout d'abord, merci pour ta réponse HarleyApril.
En ce qui me concerne, la deuxième proposition n'est pas envisageable car je n'ai qu'un très faible échantillon de protéine que je ne peux pas lyophiliser car c'est pour faire de la biocristallisation (ma prot serait alors dénaturée...). Par contre pour la première proposition, il faut que j'obtienne le spectre d'absorption de ma prot c'est ça ? Par exemple je balaye entre 260 et 300nm, et ensuite je procède comment?

Encore merci pour ta réponse,

Patate38.

[HarleyApril]

tu balayes au plus large que te propose ton spectro

pour la concentration, tu dois bien avoir une idée de la masse dont tu disposes dans l'échantillon s'il a été ainsi purifié
à moins que l'activité enzymatique ou autre te permette de remonter à la concentration

[A voir en vidéo sur Futura]