Colonne C18 (normal ou inversée)

[invite5c6ad4b5]

Bonjour,
Pourriez-vous m'aider à répondre à ces questions:

Quelle est la différence entre une colonne greffée normale et une inversée?(composition)

Le colonne C18 qui est greffée inversé (la plus utilisée en HPLC) que sera son comportement par rapport à un soluté apolaire et un autre polaire? lequel sera retenu et quelle la polarité de l'éluent qui doit etre utilisé pour décrocher un soluté polaire et un autre apolaire.

Je sais que C18 est apolaire, donc elle va retenir les apolaires et les polaires sortiront de la colonne, si je me trompe pas. Donc pour décrocher ces apolaires, il faut utilisés des solvants apolaires pour avoir plus d'affinité. mais pourquoi donc on utilise que des solvants polaire? je suis conffuse.
merci pour votre aide.

-----

[invitea69ab818]

L'HPLC phase normale utilise une phase stationnaire polaire qui retiendra plus les solutés polaire les solvant utilisé sont apolaire souvent isopropanol et/ou hexane. L'HPLC phase inverse c'est le contraire on a une phase stationnaire apolaire qui retiendra plus les soluté apolaires et on utilise des solvants polaires souvent methanol, eau, acétonitrile.

En ce qui concerne le greffage les colonne C18 sont des "billes" de silicium sur lesquelles on a gréffé des fonctions avec 18 carbones il existe d'autres phases stationnaires pour la phase inverse de C2 à C18 (C8 est également beaucoup utilisé), cyano (-CN), amino(-NH₂) et phényle (-C₆H₅).
Les phases stationnaire de la phase normale sont des gels de silice beaucoup plus polaires (il existe également beaucoup d'autre gels disponible soit des gels de silice fonctionnalisés avec des groupe plus polaires soit d'autres gels style alumine)

Sur une phase C18 si ton acide n'a pas de longues chaine apolaire il y a de fortes chances qui sorte dans le front de solvant alors que la molécule apolaire sera plus retenue.

S'il s'agit d'un acide carboxilique tu peux essayer les colonnes NH₂ qui peuvent aussi être utilisé comme échangeur d'anions et qui peut en plus faire des liaisons hydrogènes pour retenir ton soluté.

On passe des solvant apolaire sur une colonne polaire et inversement car on ne veut pas que la phase stationnaire est trop d'affinité avec l'éluant car ca risque d'endommager ta colonne exemple le cylohexane ne peut pas être utilisé avec des colonnes C18 la phase stationnaire se barre!!!

[invitee4974c1f]

et quelle est la différence entre colonne C18 / C8 / CN en hplc en phase inverse ??

[sfnsfn2]

BONSOIR

Quelle est la différence entre une colonne greffée normale et une inversée?(composition)

la phase normale: une phase stationnaire polaire et une phase mobile apolaire
la phase inverse: une phase stationnaire apolaire et une phase mobile polaire

en HPLC , la silice représente le matériau de base de fabrication des colonne (on note l’existence d’autres matériaux comme l'alumine, le zirconium et les polymère qui présentent d'autres avantages) mais la silice présente l'avantage d'avoir une surface facilement modifiable ce qui a permet de greffer plusieurs fonctions selon les besoins.

la silice vierge (non modifiée) possède à sa surface des groupements polaires ce qui lui donne ce caractère, donc elle est utilisée en mode normal (et en mode HILIC). la silice modifiée par des groupements polaires comme l'amine, la diol, la cyano... donne des phase stationnaires polaires, donc le mode normal.

si une modification dont laquelle on fixe un groupement apolaire (chaine carbonique, un phényle, cholestérol...), la phase est apolaire et dans ce cas on parle de la chromatographie en phase inverse.

Le colonne C18 qui est greffée inversé (la plus utilisée en HPLC) que sera son comportement par rapport à un soluté apolaire et un autre polaire?

les molécules ont une affinité vers la phase stationnaire qui les retient, cela veut dire que le comportement d'une phase stationnaire vis-à-vis les solutés est de la même nature: les composés qui ont la meme nature que la phase stationnaire sont retenue et les composés qui n'ont pas la même nature ne sont pas retenus (qui ce ressemble s'assemble).

lequel sera retenu et quelle la polarité de l'éluent qui doit etre utilisé pour décrocher un soluté polaire et un autre apolaire.

la phase mobile sert à éluer les composés de la colonne, et cette phase mobile est caractérisée par une force d'élution. on a dit que la phase mobile a une caractère opposé de la phase stationnaire et généralement elle est composée d'un mélange de solvant qui sont classer par leurs force d'élution.

en phase normale, lorsque la polarité (le caractère hydrophile) du solvant augmente sa force d'élution augmente (un acide est plus éluant qu'un alcool).
en phase inverse c'est le contraire.

supposant une phase mobile composé du solvant S1 et S2 utilisée en mode normale sachant que S1 est plus polaire (éluant) que S2 (n'oublie pas que les deux sont apolaire).

on HPLC, on utilise une phase stationnaire du même caractère que les composés à séparer.
on est en phase normale et notre analyte et polaire, il est retenu par la phase stationnaire et élué par la phase mobile. si on cherche à l'éluer rapidement de la colonne, on doit augmenter la force d'élution de la phase mobile, donc augmenter le pourcentage du solvant polaire pour augmenter l'affinité du soluté vers la phase mobile.

Je sais que C18 est apolaire, donc elle va retenir les apolaires et les polaires sortiront de la colonne, si je me trompe pas. Donc pour décrocher ces apolaires, il faut utilisés des solvants apolaires pour avoir plus d'affinité. mais pourquoi donc on utilise que des solvants polaire? je suis conffuse.
merci pour votre aide.

en phase inverse on utilise des phases mobiles polaires (la phase stationnaire et la phase mobile ont des caractères opposés). en RPLC, la phase mobile est composé d'une partie aqueuse et une partie organique miscible, ces deux partie n'ont pas la même polarité, la partie aqueuse est plus polaire que la partie organique, donc si on veut décrocher un composé en phase inverse on doit augmenter la force d'élution donc augmenter le pourcentage de la partie ...

(si tu as compris compléter la phrase)

[A voir en vidéo sur Futura]

[sfnsfn2]

et quelle est la différence entre colonne C18 / C8 / CN en hplc en phase inverse ??

la différence est la polarité de la phase, la CN est plus polaire que la C8 qui est plus polaire que la C18
plus la longueur de la chaine organique augmente plus le caractère polaire diminue.