Biochimie ordre d elution

[arkb]

bonjour

je ne comprends pas comment on trouve une solution a cette question

Quel sera l'ordre d'élution des 2 acides aminés suivants lors d'une chromatographie d'échange CATIONIQUE à pH = 1,5 ?




pouvez vous m aider svp merci bcp
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[HarleyApril]

Bonjour

Quelle est la charge de Ala et de Lys à pH 1.5 ?

Dans une chromatographie ionique cationique, le composé le plus positif est le plus retenu.

Cordialement

[arkb]

justement je ne sais pas comment calculer les charges à un pH donné, j ai poser la question sur le forum mais je n ai pas encore de reponse

pour cette chromatographie, si je ne me trompe pas on doit faire evoluer le pH en partant tu plus bas et augmenter au fur et a mesure, et on aura , au fur et a mesure, les ions qui vont se positionner sur la chromato. il faut que le ph de la chromato soit un peut plus elevé que le phi de la premiere espece a extraire, pour commencer et on augmente jusqu a extraire toutes les especes chimiques.

[Ohmaxwell]

Bonjour,

Pour connaître les charges à un pH donné, il te suffit de savoir les valeurs de pKa des couples CO2H/CO2- et NH4+/NH3. (indice, ces valeurs sont très différentes pour ces deux exemples.) Après, il te suffit de regarder l'état de charge global de tes molécules pour savoir qui migre en premier.

[A voir en vidéo sur Futura]

[arkb]

pour le COOH, le pka est de environ 2 et pour le NH3 il est d environ 9,5

je fais comment pour regarder l etat de charge global ? on eu aucun cours la dessus

[Ohmaxwell]

Le pKa d'un acide carboxylique est plutôt autour de 4-4,5 !

A défaut d'avoir un cours, de la logique suffit ^^
à pH=1,5, combien as-tu de fonctions cationiques dans la lysine ? Dans l'alanine ?
Même question pour les fonctions anioniques au même pH
à partir de là, la différence cationique-anionique te dit l'état de charge positif de ta molécule.

[jeanne08]

Lorsqu'on a l'équilibre entre acide faible et base conjuguée on a toujours Ka qui est vérifiée : Ka =(base)*(H+)/(acide)
Tu vois que le rapport (base)/(acide) = Ka/(H+) et ceci quelle que soit la façon dont on fixe le pH. Tu vois donc que la forme basique prédomine si pH> pKa et que la forme acide prédomine si pH<pKa
Deux couples à considérer pour les acides amines ( dont on connait les pKa ) RCOOH /RCOO- et RNH3+/RNH2 ... tu regardes donc puis tu comptes les charges ...

[arkb]

Lorsqu'on a l'équilibre entre acide faible et base conjuguée on a toujours Ka qui est vérifiée : Ka =(base)*(H+)/(acide)
Tu vois que le rapport (base)/(acide) = Ka/(H+) et ceci quelle que soit la façon dont on fixe le pH. Tu vois donc que la forme basique prédomine si pH> pKa et que la forme acide prédomine si pH<pKa
Deux couples à considérer pour les acides amines ( dont on connait les pKa ) RCOOH /RCOO- et RNH3+/RNH2 ... tu regardes donc puis tu comptes les charges ...

je vois bien que la forme acide predomine mais je ne comprend toujours pas ou sont situé les charges a compter ou comment les calculer

si la forme acide predomine alors la charge est negative mais c est vrai dans les 2 cas...

[arkb]

je vois bien que la forme acide predomine mais je ne comprend toujours pas ou sont situé les charges a compter ou comment les calculer

si la forme acide predomine alors la charge est negative mais c est vrai dans les 2 cas...

[Ohmaxwell]

Si tu es en milieu acide, as-tu NH3+ ou NH2 ?
Pareil pour CO2H ou CO2- ?
Combien as tu de fonctions protonées à pH=1.5 ? Neutres ? Déprotonées ?
Tes molécules sont-elles globalements positives, neutres ou négatives ?

[arkb]

ah daccord j ai compris je crois merci

donc en milieu acide j ai NH3+ et CO2H

donc j ai 1 charge positive dans l alanine et 2 charge positives dans la lysine

il y a 1 fonction protonée NH3+ pour l alanine et 2 pour la lysine,
et 2 fonction COOH neutres, une dans la lysine et une dans l alanine

donc l alanine est globalement neutre et la lysine est globalement positive , à pH=1,5

[arkb]

donc l alanine part avant la lysine car la lysine est la plus positive des deux?

[Ohmaxwell]

Tu as compris, mais tu as fait une petite erreur : à pH=1,5, l'alanine est globalement chargée 1+ tandis que la lysine est globalement chargée 2+ ! Elle est donc plus retenue que l'alanine en chromato cationique

[arkb]

daccord donc les deux sont globalement positives, et si on avait eu une charge - et une charge + pour une meme molecule, elle aurait ete globalement chargée neutre.

et pour le pKa du coup ce sera toujours 9-9,5 pour le NH3 et 4-4,5 pour le CO2H ?

ce seront toujours les 2 seuls a s ioniser et qu on devra tenir compte dans le cas d acides aminés?
il n y a pas d autres pKa a retenir que ceux ci?

[arkb]

la charge globale et la charge nete c est la meme chose ?

[Ohmaxwell]

Alors, parmi les acides aminés naturels, tu as encore d'autres pKa, je te cite ceux qui sont ionisables dans l'eau :
-La fonction guanidine de l'aginine
-La fonction thiol de la cystéine
-Le groupe imidazole de l'histidine
-Le OH phénolique de la tyrosine.

Et je tiens juste à rectifier une boulette que j'ai dite hier, en effet, pour un acide aminé, le pKa de l'acide carboxylique est voisin de 2-2,5, je parlais d'acides carboxyliques dans le cas général, moi !
Je n'avais jamais entendu parler de charge nette, mais je suppose que les définitions sont voisines, oui

[arkb]

daccord merci beaucoup