plasmide pDONR/Zeo

[inviteb853f23b]

Salut,
Savez-vous à quoi sert ce plasmide? Les sites présents sont attP1 et 2 à quoi correspondant-ils? M13 forward et reverse ainsi que le gène ccdB?
Savez-vous à quoi sert le gène ROP ORF dans un plasmide?
merci!!
luciole
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[jmbowie]

Salut,
Savez-vous à quoi sert ce plasmide? Les sites présents sont attP1 et 2 à quoi correspondant-ils? M13 forward et reverse ainsi que le gène ccdB?
Savez-vous à quoi sert le gène ROP ORF dans un plasmide?
merci!!
luciole

attP1 et attP2 sont des sites d'attachement, c'est à dire des sites de recombinaisons. Ils sont reconnus par des recombinases de façon spécifique.

Je crois comprendre d'après la carte d'un de ces vecteurs
(http://www.invitrogen.co.jp/gateway/img/12535_001.gif)

qu'ils sont concus pour interrompre des gènes. En gros, il s'agit d'une technique dans laquelle le gène à interrompre est bordé par les même sites de recombinaison.
En introduisant un plasmide codant la recombinase spécifique, on peut remplacer le gène par le marqueur de résistance (CmR). Le gène se trouve quant à lui inséré dans le vecteur.
Les flèches avec "M13" désignent des régions sur lesquelles s'apparient des amorces qu'ils fournissent peut-être avec le kit et permet de vérifier que le gène est dans le plasmide (PCR, séquence).
Quant à ccdB, il code une protéine "poison" et, comme CmR, est un marqueur de sélection positive: si ton gène est bien inséré dans le plasmide, au bon endroit et tout, ccdB ne sera plus fonctionnel et en principe seul les clones recombinants (= portent les plasmides ayant incorporé un gène) sont viables.

J'espère ne pas avoir été trop confus.

[inviteb853f23b]

ok merci de ta réponse et ROP? est ce que tu ne connaitrais pas un site qui parle des plasmides ligation... en général en fait les bases?...
merci

[Jean-Luc P]

Ne serait-ce pas un plasmide du kit Gateway d'Invitrogen ?

https://www.invitrogen.com/content/s...ateway_man.pdf

[A voir en vidéo sur Futura]