Génie génétique

[invite0f7521a9]

Bonsoir,

Voilà je dois faire un problème dont l énoncé est le suivant :

"Afin de caractériser au niveau moléculaire la mutation hisD984, les ADN des souches LT2 ( souche sauvage d origine) et TR6238 ( souche LT2 modifiée contenant la mutation hisD984 après mutagénèse chimique) sont préparés et digérés séparément par différentes enzymes de restriction. Le Southern-blot correspondant est hybridé avec la sonde M13Hol76 correspondant à un fragment cloné d une portion de l opéron Histidine."

Le problème c est que je me demandais comment la sonde radioactive avait été générée à partir de l ADN PUR de M13Hol76 ?
Est-ce qu il y a une manipulation à réaliser sur la sonde avant de l introduire dans le sac à hybridation ?

merci de votre aide
-----

[invite84b0382c]

bonjour,

pas sur de bien comprendre la question

ta sonde radioactive est ton M13Hol76. Il s'agit surement de portion d'ADN radioactif purifié. Elle est sans doute introduit dans ton produit de digestion avant de le faire migrer. Dans la logique, cette sonde se liera uniquement à ta souche sauvage.

[wishangel]

salut,

Je pense que la sonde a du etre préparé par PCR en utilisant des dNTP radioactif... En tout cas c'est ce que je fait pour marqué ma sonde mais je ne le fait pas avec la radioactivité donc je sais pas si ca se passe de la meme facon...