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Fluorochromes?



  1. #1
    stonpz38

    Fluorochromes?

    Bonjour à tous,
    J'utilise actuellement de l'Ethidium Homodimer pour marquer mes cellules mortes (Viability/Cytotoxicity Staining Kit for Animal Live & Dead Cells). Connaissez vous un autre fluorochrome du même type, se fixant à l'ADN mais n'émettant pas dans le rouge (émettant dans le bleu voi UV)?
    Merci de votre aide

    -----


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  3. #2
    mantOs

    Re : Fluorochromes?

    Salut

    Se fixant sur l'ADN tu as le DAPI .

    http://www.snv.jussieu.fr/bmedia/Mitose/43fluobleue.htm

    Cordialement.
    Desole pour l'absence d'accentuation, je suis sur clavier QWERTY.

  4. #3
    Akïn

    Re : Fluorochromes?

    Bonjour,

    Ce qui t'interesse apparemment c'est de voir si les cellules sont vivantes ou mortes.

    Il existe un kit Tunnel permettant de "mesurer" par fluorescence les taux d'apoptose. Le fluorochrome se fixe à l'ADN.
    A ma connaissance il y a au moins deux couleurs: rouge (je n'ai plus le nom en tete) et vert (FITC) Il existe sûrement un bleu. Si ca t'interesse, je peux tenter de me renseigner car une de mes collègues absente ce jour en utilise régulièrement.

  5. #4
    stonpz38

    Re : Fluorochromes?

    Oui, c'est bien pour voir mes cellules en apoptose.
    J'utilise un kit qui me permet de déteminer si mes cellules sont viables ou non: fluorescence verte quand viable (calcein AM) et rouge quand les cellules sont mortes (ethidium homodimer). Je voulais savoir si il existait un équivalent de l'ethidium, un fluorochrome se fixant sur les cellules apoptotiques mais ne fluorescents pas dans le rouge.
    Merci de votre aide

    Oui Akîn, je veu bien que tu te renseigne. Merci beaucoup

  6. #5
    Jean-Luc P

    Re : Fluorochromes?

    Citation Envoyé par Akïn Voir le message
    Bonjour,

    Ce qui t'interesse apparemment c'est de voir si les cellules sont vivantes ou mortes.

    Il existe un kit Tunnel permettant de "mesurer" par fluorescence les taux d'apoptose. Le fluorochrome se fixe à l'ADN.
    Et si c'est de la nécrose ? De l'autophagie ?
    Jean-Luc
    La violence est le dernier refuge de l'incompétence.
    Salvor Hardin

  7. A voir en vidéo sur Futura
  8. #6
    Akïn

    Re : Fluorochromes?

    Pour les processus de nécrose, je pense que le tunnel doit aussi bien fonctionner. Je demanderai confirmation à ma collègue quand je la vois mais à priori, je pense que ca doit marcher. Le fluorochrome se fixant à l'ADN, ca doit pas changer grand chose car dans les processus d'autophagie ou de nécrose l'ADN est également dégradé au final

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  10. #7
    Jean-Luc P

    Re : Fluorochromes?

    PAs de la même manière, et plus tradivement : le principe de l'apoptose c'est bien qu'on génère un nombre important d'extrémités marquées par le tunnel (Cf migration avec des bandes multiples de 128 kb)
    Jean-Luc
    La violence est le dernier refuge de l'incompétence.
    Salvor Hardin

  11. #8
    mantOs

    Re : Fluorochromes?

    N'étant pas spécialiste des termes usités, quand vous dites : "tunnel" c'est pour le type de microscopie ?

    Merci d'avance
    Desole pour l'absence d'accentuation, je suis sur clavier QWERTY.

  12. #9
    Jean-Luc P

    Re : Fluorochromes?

    Non, TUNEL c'est un acronyme, et pardon il n'y aqu'un seul "n"

    extrait de http://membres.lycos.fr/hippolinae/alzheimer.htm
    I.1.b.2 Par la méthode TUNEL
    Par cette méthode, on utilise le fait que l'apoptose s'accompagne d'une fragmentation de l'ADN. Le terme TUNEL vient de TdT (Terminal deoxynucleodityl Transferase)-mediated dUTP-biotin Nick End Labelling.
    Cette méthode consiste à ajouter aux extrémités 3'-OH, un nucléotide marqué, puis le signal est amplifié grâce à une peroxydase.
    Mais récemment, on s'est rendu compte que cette méthode pouvait donner un faux positif pour les cellules en nécrose, c'est pourquoi, désormais, on recommande de ne l'utiliser qu'après avoir prouver avec une autre méthode l'apoptose ; après cette vérification elle reste toujours très efficace pour la quantification des cellules en apoptose.
    Jean-Luc
    La violence est le dernier refuge de l'incompétence.
    Salvor Hardin

  13. #10
    stonpz38

    Re : Fluorochromes?

    Merci de vos conseils.

  14. #11
    mantOs

    Re : Fluorochromes?

    Merci pour la précision
    Desole pour l'absence d'accentuation, je suis sur clavier QWERTY.

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