Salut!
J'utilise actuellement de la résine TALON Metal Affinity de chez Clontech pour purifier des protéines His taggées.
J'étudie l'addition d'une protéine His taggée que j'apellerai H sur une autre protéine que j'apellerai P (désolé de rester si obscure mais ces recherches sont assez nouvelles et rien n'est publié pour le moment).
Or il s'avère que lors de nos purifs, nous obtenons certes la protéine P couplée à H (=His) (donc rien d'anormal) mais également une grosse quantité de protéine P seule sans l'autre protéine couplée à l'histidine (la taille de la bande le confirme), ce qui n'est pas normal (bien que l'on surexprime P et H).
Donc je me demande si on ne pourrai pas enlever ce "bruit de fond" (qui ne doit pas partir totalement car les protéines sont surexprimées mais qui doit quand même fortement diminuer) en saturant la résine avec 1% BSA avant l'incubation avec les échantillons....
Donc voilà juste pour voir si certains d'entre vous ont déjà eu ce genre de problèmes, avec ce type de résine ou pas, et si oui comment ils l'ont résolu (si ils l'ont résolu).
A+ et merci pour les réponses éventuelles!
Vinc
-----