conditionnement de gélose... HELP!

[invitecb07accc]

Bonjour!

Des élèves veulent faire des tests dans le cadre d'un projet de sciences. Ils doivent d'abord faire croître des bactéries.
Je dispose d'un incubateur, de pétris et de gélose (agar) sous forme solide.
Par contre, je n'ai pas d'autoclave pour stériliser.
Après dissolution du solide, j'ai mis les pétris à l'incubateur mais dès le lendemain on notait déjà un développemetn quelqcinque, avant même d'avoir inoculé.
La question que je posais est: est-il possible de stériliser les milieux en le mettant simplement dans un petit four? Est- ce que le milieu serait altéré? À quelle température et combien de temps?
Merci de me répondre!
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[piwi]

Bonjour,

J'ai bien peur pour vous que:
1. Le milieu ne soit altéré.
2. La stérilisation non effective.

Je ne sais pas ce que vous souhaitez faire exactement mais vous pouvez toujours tenter d'ensemenser richement la boite avec vos bactéries sous la flamme d'un bec benzen (je n'ai jamais tenter de faire lecher la gelose par la flamme, c'est peut être à essayer pour avoir un petit + de propreté.)
Voyez si la compétition entre micororganismes ne tourne pas à la faveur de vos bactéries d'interet durant une culture d'un ou deux jours.

Cordialement,
piwi

[invitecb07accc]

Merci Piwi.
Je sais que mon milieu est maintenant contaminé (il n'avait pas été préalablement stérilisé)
Par contre, je voudrais recommencer et c'est pourquoi je me demandais si je pouvais justement stériliser des nouvelles préparations en les mettant au four? Si oui à quelle température et combien de temps?
Merci encore!

[gorben]

Bonjour,

Honnetement, lecher la gelose avec la flamme du bec, ce n'est pas recommende (bcp trop dangereux et la gelose fond immediatement).

En general on ne fait pas cuire au four les geloses. Par contre pour reduire les risques de contamination, vous pouvez essayer de faire fondre la gelose dans un bain marie (par exemple 30 min apres ebulition, bien s'assurer que le bouchon soit debloque) immediatement apres avoir reconstitue le milieu de culture. Ca vous permet en meme temps de couler les boites dans la foulee (quand la gelose a un peu refroidie). Par contre, ce n'est pas une sterilisation. Il vous faut stocker les boites au frigo et ne pas tarder a les ensemencer.
Si vous n'avez pas acces a un bain marie, vous pouvez de la meme maniere faire fondre la gelose au micro-onde, mais la encore assurez vous bien que le bouchon de la bouteille soit devisse.
La derniere solution est d'ajouter un antibiotique a la gelose une fois qu'elle est en surfusion, mais la ca depend de ce que vous voulez faire avec ces boites...

Juste par curiosite, ils ont quel age les eleves?

bon courage !

[A voir en vidéo sur Futura]

[invite0b3269d2]

Bonjour,

La derniere solution est d'ajouter un antibiotique a la gelose une fois qu'elle est en surfusion, mais la ca depend de ce que vous voulez faire avec ces boites...

bon courage !

Bonjour

L'antibiotique n'est peut etre pas une bonne solution car à mon avis dans le cas présent le but est de déterminer une flore totale, hors l'utilisation d'un antibiotique pourrait inhiber une grande partie de la flore bactérienne aérobie.

[invite9c7f9ec6]

Je me rappel que la machine qui etait utilisé pour couler les geloses au lycée, utilisais une lampe a ultraviolets a la sortie des boites pour la sterilisation.

Alors je ne connais pas les conditions de sterilisation avec une lampe a ultraviolet (temps d'exposition) mais c'est peu etre la solution.

Sinon le stockage au frigo me parait etre une solution si on ne veux pas retrouver des microorganismes avant meme l'inoculation par tes eleves, cela dit ca ne resout pas le problme de sterilisation si ta gelose est contaminé, tu aura toujour des organismes que tu n'aura pas ensemensé volontairement.

[gorben]

Salut,

La lampe à UV ne permet pas de stériliser la gélose, elle permet de les couler dans un environement stérile. C'est pour cette raison qu'en theorie elle doit être allumée 20 minutes avant de commencer à couler les boites, pour stériliser la "chambre".

Franchement, le plus simple et de faire bouillir 20 a 30 minutes, ensuite de couler les boites rapidement dans un local propre, voire sous la flamme d'un bunzen si vous en possedez un (attention pas un rechaud de camping il n'est pas du tout adapté et la résultat est catastrophique ). Et ensuite, vous pouvez les faire sécher à l'air libre (fermée et retournée bien sur) pendant 24h a 48h, cela permet d'enlever la condensation et de vérifier la sterilitée.

A+

[piwi]

Franchement, dans mon labo nous n'avons pas de sortie de gaz (c'est vrai que ca semble impensable mais bon....), on fait tous nos clonages avec des petites recharges butagaz et on est pas victime de contamination. Il est vrai que ce ne sont que des clonages et pas du diagnostic bactérien, mais dans ces conditions, si l'on cultive les boites quelques jours et que l'on conserve ensuite à +4°C ca va.

cordialement,
piwi

[invite9c7f9ec6]

Pas besoin de sortie de gaz pour avoir un environnement sterile. Par exemple au lycée, on avait pas non plus de sortie de gaz, on utilisais des becs electriques, pour couler certaines geloses, on les preparaient au bain marie, puis on les coulais en boite dans la zone sterile du bec electrique, refroidissement sechage normal ensuite, pas de contaminations si on manipule bien.

evidement il faut disposer du materiel.

[gorben]

Franchement, dans mon labo nous n'avons pas de sortie de gaz (c'est vrai que ca semble impensable mais bon....)

Ne t'inquiete pas, d'ici quelques temps ne pas avoir d'arrivee de gaz dans les labos sera normal (ca a ete interdit)

Je maintient que le rechaud n'est pas adapte, d'une part c'est dangeureux, d'autre part la base du rechaud est trop haute / a ta hauteur de travail, du coup le flux d'air n'est pas bon et ca ne sert a rien, voire ca ramene des germes. Manipuler dans une piece propre est mieux (moins dangeureux pour un resultat au moins aussi bien).
De plus, dans un clonage tu ajoutes souvent un antibiotique dans les boites, ca limite les risques de contaminations

A+

[invite7825c20b]

salut à tous

avant d'avoir accés à un autoclave, je me rappelle que je me servais d'une cocotte-minute pour stériliser ma gélose.
Ca marchait plutôt pas mal. Une fois que c'est fait, tu la laisses se solidifier dans ta bouteille et tu peux la conserver.
Après pour couler des boîtes, un simple tour au micro onde et voilà ça redevient liquide et tu peux couler un milieu.
Et pour rentrer dans le débat, la flamme a l'avantage de permettre d'enlever les éventuelles bulles!!!!
adi

[invitee8b3f97e]

Salut !

Malheureusement en l'absence d'un autoclave, impossible d'être sur de la stérilité d'un milieu. Les deux meilleurs solutions de rechange sont :
- la cocotte minute
- laisser bouillir 30-45 min sur une plaque chauffante

Le problème principal que vous allez rencontrer ce sont les spores de levures et moisissures, qui sont malheureusment très résistantes à la chaleur.

Le micro onde est à proscrire dans le cadre de manipulation avec des étudiants. C'est dangereux et interdit.

Le fait d'ensemencer le milieu juste après l'avoir coulé ne resoudra pas le problème non plus si la gélose n'est pas stérile, cela ne fera qu'étaler les microorganismes contaminant et faussera complètement les dénombrements.

Pour résuler je conseillerais :
- préparation du milieu selon les recommandation du fabricant (dilution, ébulition)
- stérilisation à la cocotte minute : attention, je ne sois pas sur que ce soit réglementaire dans le cadre d'un laboratoire. Ne surtout pas oublier de prendre les précautions d'usage : bouteille en pyrex, bouchon résistant à la chaleur, bouchon suffisament dévissé pour laisser sortir la vapeur (risque d'explosin de la bouteille), pas plus de 15 min de stérilistion...
- laisser la gélose refroidir dans la bouteille
- la régénérer avant utilisation (au bain marie, pas au micro onde)
- la couler stérilement dans les boites à la flamme d'un bec bunsen
- laisser les boites 48h à 37°C pour voir si elles sont contaminées
- ensemmencer les boites non contaminées

Bonne manip'