Bonjour du matin, chagrin,
Et noeud dans la tête:
On me demande quels sont les avantages/inconvénients des stratégies d'insertion de gènes: ciblée et aléatoire (par transposition). J'ai quelques idées intuitivement, mais je ne sais pas si elles sont exactes et surtout exhaustives... Les voici:
Insertion ciblée:
1.permet la disruption du gène endogène par recombinaison homologue. ex: fusion d'opéron gène x' - lacZ recombinant avec le gène x endogène: la souche sera X- et l'activité Béta-gal dépendra du niveau d'expression de x.
2. possibilité de tester si le gène disrupté est bien x en faisant de la complémentation par exemple
3. Inconvénient: suppose le maintien de l'insertion, donc l'application d'une pression de sélection et donc que la construction porte le gène de sélection en plus du gène rapporteur. Possible?
Insertion aléatoire:
1. permet l'insertion en grand nombre de copies
2. Inconvénient: on ne sait pas où la contruction s'intègre, elle peut donc être insérée au coeur d'une séquence essentielle à la régulation du gène d'intérêt et donc l'activité du gène rapporteur peut ne plus refléter strictement le niveau d'expression du gène d'intérêt
3. La séquence peut même s'intégrer dans un gène essentiel à la survie et l'inactiver
4. Je suppose qu'il faut aussi un gène de sélection + pression de sélection...
5. On part sans a priori, donc on peut pêcher un truc intéressant, justement en observant les différences d'activités entre les différents recombinants obtenus et en tirer des conclusions sur les sites d'insertion.
On me demande en plus "Comment obtenir une fusion fonctionnelle par insertion aléatoire? Fréquence d'obtention des fusions fonctionnelles?"
Ça doit avoir un rapport avec les avantages et inconvénients,...
Au secours, j'ai la tête toute emmêlée!
SVP, dîtes moi où je me plante, ce à quoi je n'ai pas pensé, etc...
Merci d'avance,
Cécilus
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"La lumière des étoiles tombe doucement comme une pluie. Elle ne fait pas de bruit, elle ne soulève pas de poussière, elle ne creuse aucun vent" J.M.G. Le Clézio, Désert
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