Bonjour a tous,
petite question du a une betise de ma part today. Je souhaiterai savoir si des lysats proteiques tiennent le choc a temperature ambiante. Aujourd hui j ai oublie toutes mes extractions proteique sur la paillasse ( y avait quand meme inhibiteur de protease) et donc je ne sais pas si mes echantillon seront bons pour un western.
Merci
Je vous conseil de refaire l'expérience car si vous souhaitez des résultats pouvant être pris en compte, il faut être le plus minutieux possible.
Je crois que les protéines se gardent au congélo (-20°c voir -80°C) pour éviter qu'elles se dénaturent.Envoyé par delstephie
je suis d'accord sur le fait qu'il soit plus sage de refaire l'experience...
Mais ca depends ce qui est prevu sur ces echantillons...
Si c'est juste verifier la presence d'une proteine et que le western donne une bande...pas de probleme, un premier blot donnera deja une indication...
Si c'est pour une comparaison subtile de variation d'expression...mieux vaut refaire la manip ensuite...
Tout depend aussi si la cible est une proteine stable ou fragile, si elle est presente en millions de copies (cytosquelette...) par cellule ou quelques copies (facteur de transcription...proteine regulatrice...).
Selon le resultat de ce premier western...si une belle bande obtenue ou si 10 bandes faibles de faible poids moleculaire...
Ca depend de l'echantillon, certains tissus sont plus riches en proteases (pancreas par exemple...)...
etc...
