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synchroniser cerevisiea en G2/M



  1. #1
    constance

    synchroniser cerevisiea en G2/M

    Bonjour,

    Alors voilà mon problème :
    Je veux bloquer des levures S.cerevisiae en G2/M et les maintenir ainsi pendant 10h environs. Le nocodazole et le benomyl ne sont efficaces que 4 à 5H. Je sais qu'il existe aussi des mutant température sensitive de cdc14 ou cdc20 qui peuvent arrêter les cellules en G2/M mais je ne sais pas combien de temps. Quelqu'un les a t il déjà testé ?
    merci pour votre aide

    la désespérée de l'arrêt G2/M

    -----


  2. #2
    le_troll

    Re : synchroniser cerevisiea en G2/M

    Salut

    Le principe des mutants thermosensible c'est de reveler la mutation lorsque la levure pousse a plus haute température (souvent 37 au lieu de 30). donc normalement si ton mutant bloque ta levure en phase G2/M à température permissive, ta levure devrait y rester jusqu'a ce que tu baisses la température. La seule chose que je vérifierais c'est que le temps d'incubation que tu vas utiliser n'affecte pas la survie de tes levures.

  3. #3
    constance

    Re : synchroniser cerevisiea en G2/M

    Salut
    La survie des cellules n’est pas affectée à 37°C, mais c’est l’induction galactose que je veux faire pendant que les cellules sont arrêtées en G2M qui ne marche pas à 37°C dans mon fond génétique (W303) ! Je ne peux donc pas utiliser les mutants thermosensibles pour ma manip. Changement de stratégie : les mutants comme cdc20 ou cdc14 sous contrôle d’un promoteur répressif (comme cdc20 MET : en milieu –met tout va bien, mais si on ajoute de la méthionine les cellules se bloquent en mitose) mais je ne sais pas combien de temps ces cellules restent bloquées en G2M. Dans les papiers ils ne mentionnent que le temps dont ils ont eu besoin pour faire leur manip (souvent que 2 ou 3H) mais pas le temps max de blocage en mitose pour ce type d’arrêt. Est-ce que quelqu’un a déjà utilisé ce type de mutant ?
    merci
    constance

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