Culture de fibroblastes

[invite1157e367]

Bonjour à tous,

Je travaille actuellement sur des cellules en culture primaire. Ce sont des fibroblastes provenant de biopsies de peau de patients atteints de maladies métaboliques.
J'aimerai savoir combien de temps peut-on garder ces cellules en culture sans avoir de modifications? En effet cela fait quelques mois que nous les cultivons afin de pouvoir faire nos différentes manips et j'ai peur qu'il y ait des modifications dans les cellules.
Comment peut-on accélerer leur division car certaines mettent beaucoup de temps à pousser?

Merci d 'avance
Chouky
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[Vinc]

Bonjour!
Les cultures primaires au sens strict du terme ne peuvent être gardées que quelques jours en culture, puis elles meurent (dans le cas de cellules non cancéreuses bien entendu). Non lorsque vous dites quelques mois, est ce que vous sous entendez que ce sont des prélèvements réguliers depuis quelques mois, ou un seul prélèvement il y a quelques mois qui continue de vous donner des cellules (ce qui sous entend que vos cellules se sont immortalisées)?
L'obtention d'une lignée immortalisée passe obligatoirement par la modification des cellules, qui se fait la plupart du temps par sélection et apparition d'un clone immortel non soumis à la limite de Hayflick.

V.

[invite1157e367]

Nous cultivons ces cellules depuis quelques mois à partir d'un seul prélevement. Nous avons décongelés des ampoules contenant ces cellules et elles ne sont pas immortalisées. De plus, nous sommes sûr qu'elles ne sont pas mortes car nous les observons en microscopie electronique.
Céline

[Vinc]

Je ne comprends pas bien.... Si c'est un seul prélèvement, théoriquement au bout de 50 cycles les cellules meurent (je caricature)... Comment pouvez vous être sûre qu'elles ne sont pas immortalisées?
Et pas besoin de microscoppie électronique pour voir si les cellules meurent...

V.

[A voir en vidéo sur Futura]

[inviteca614eab]

Salut,

Peut etre que je vais dire des bétises, mais je pense qu'à partir du moment ou tu passes d'un système physiologique à de la culture cellulaire, il y aura forcément des changements au niveau de l'expression de certains gènes (le type de changement dépendra probablement du milieu utilisé et de l'utilisation de facteur de croissance pour maintenir les cellules ou autres). Maintenant, si tu t'intéresses au métabolisme et que tu disposes d'ampoules, tu pourrais comparer les aspects qui t'intéressent entre les cellules fraichement décongelé et celles en culture depuis plus longtemps au moins tu sauras s'il y a eu des dérégulations majeures au fil des passages.

[Vinc]

Pour préciser et rebondir sur ce qu'a dit Léo, il est évident que l'utilisation de cellules en culture entraine des changements moléculaires au cours du temps! Les lignées utilisées en routines dans les labos ; comme par exemple les Hela, ont un génome qui n'a plus grand chose à voir avec le génome des cellules initialements prélevées sur Henrietta...
Ce sont des bêtes de cirque, et ça permet également d'expliquer pourquoi une manipe peut ne plus fonctionner du jour au lendemain alors qu'elle a donnée de beaux résultats pendant plusieurs mois....

V.

[Tiscarab]

Bonjour à tous,

Je travaille actuellement sur des cellules en culture primaire. Ce sont des fibroblastes provenant de biopsies de peau de patients atteints de maladies métaboliques.
J'aimerai savoir combien de temps peut-on garder ces cellules en culture sans avoir de modifications? En effet cela fait quelques mois que nous les cultivons afin de pouvoir faire nos différentes manips et j'ai peur qu'il y ait des modifications dans les cellules.
Comment peut-on accélerer leur division car certaines mettent beaucoup de temps à pousser?

Merci d 'avance
Chouky

Bonjour
quelques remarques sur ce qui a été dit
la culture primaire au sens strict c'est lorsque tu cultives la première fois ex vivo tes explants, dès que tu fais un passage de tes fibroblaste ce n'est plus une culture primaire, mais une sous-culture qui tend vers une lignée définie (de fibroblastes ici).
J'ai fait souvent des cultures de fibroblastes et cela peut effectivement etre gardé assez longtemps en culture car ils ne se divisent pas tres vite (surtout ceux issus de l'adulte) sans etre transformés. Mais fatalement au bout d'un certain nb de passage tu vas avoir un phénomène de sénescence (il vont plus se diviser et rester quiescents puis mourir)
Je dirais qu'il n'y a pas de pb à les utiliser tant que la sénescence n'est pas atteinte (tant qu'ils poussent en gros). Les modifications viendront avec la sénescence.
Il est difficile d'accélérer leurs divisions, tu peux essayer d'ajouter des facteurs de croissances (FGF notamment).
++

[invite1157e367]

Merci à vous tous, j'ai eu les reponses à mes questions
A bientôt!!
Chouky