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Clonage Eucaryote



  1. #1
    azzurela

    Clonage Eucaryote

    Bonsoir ,

    Me voici avec un gros stress d'incompréhension

    Concernant le clonage de cellules eucaryotes, est ce possible qu'une cellule de mammifère accepte un plasmide et le réplique comme il faut ??? ou ce plasmide (contenant le gène étranger) doit il absolument être intégré au génome cellulaires???

    Quels sont les caractéristiques que doit posséder un plasmide pour les levures?

    Merci de répondre .... les exams approchent et le stress grimpe

    Vivement les vacances!!!

    -----


  2. Publicité
  3. #2
    azzurela

    Re : Clonage Eucaryote

    Et un plasmide pour cellules a mammifaires???

  4. #3
    azzurela

    Re : Clonage Eucaryote

    personne ???

  5. #4
    MaliciaR

    Re : Clonage Eucaryote

    Bon, on se calme

    Citation Envoyé par azzurela Voir le message
    Concernant le clonage de cellules eucaryotes, est ce possible qu'une cellule de mammifère accepte un plasmide et le réplique comme il faut ??? ou ce plasmide (contenant le gène étranger) doit il absolument être intégré au génome cellulaires???

    Quels sont les caractéristiques que doit posséder un plasmide pour les levures?
    Je ne suis pas sûre de comprendre ta question. Tu veux faire exprimer un gène étranger dans une cellule eucaryote ou tu veux cloner une cellule eucaryote?

    Et dis, quelles sont les propriétés d'un vecteur qui lui permettent d'être exprimé dans une cellule donnée?

    Cordialement,
    An expert is one who knows more and more about less and less.

  6. #5
    Yoyo

    Re : Clonage Eucaryote

    salut

    deja repondu dans une autre discussion.

    YOyo

  7. A voir en vidéo sur Futura
  8. #6
    azzurela

    Re : Clonage Eucaryote

    En gros, si je met un plasmide dans une cellule de mammifaire, est ce que le plasmide sera "pris en charge" par la cellule, c'est à dire, est ce qu'il sera recopier etc. ??

    Par contre, yoyo, j'ai pas compris ta réponse dans l'autre topic , c'est quoi un plasmide réplicatif?, de l'expression transitoire ????

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  10. #7
    Yoyo

    Re : Clonage Eucaryote

    Salut

    Un plasmide replicatif est un plasmide qui est capable de se répliquer dans une cellule.
    L'expression transitoire consiste a faire rentrer une molecule d'ADN en sachant que celle-ci ne sera pas repliquer, mais comme les cellules de mammiferes se multiplient doucement, l'effet de dilution n'est pas super important.

    YOyo

  11. #8
    azzurela

    Re : Clonage Eucaryote

    Salut,

    Ok donc selon toi, si j'introduis un plasmide dans une cellule animale.... ça ne mènera à rien , c'est bien ça ?

    Dans ce cas, il est obligatoire d'introduire le gène directement dans le génôme de la cellule grâce à des virus.

    Celà dit, quelque chose me turlupine l'esprit, dans le cas de création de souris transgeniques, on a vu qu'on prenait un ovule qui vient d'être fécondé par un spermatozoïde. Cette cellule possède donc un noyau mâle et un noyau femelle. Le noyau mâle étant plus gros, on y injecte grâce à une très fine aiguille de l'ADN. Mais alors, ce n'est pas de l'ADN plasmidique?
    Il y a obligatoirement recombinaison avec le matériel génétique mâle? Comment ça se passe?

    Merci pour vos réponses

  12. #9
    Yoyo

    Re : Clonage Eucaryote

    salut

    Oui dans ce cas la l'ADN s'integre dans le genome de la souris en effet.

    Si tu peux mettre un plasmide dans une cellule, mais s'il ne sy replique pas alors il va etre perdu petit a petit a chaque division cellulaire.

    YOyo

  13. #10
    azzurela

    Re : Clonage Eucaryote

    Ouiiiiiiiiiii.... je viens de comprendre ....d 'où le fait que dans mon cours on parle de " expression transitoire"

    Wouuuww, tout s'illumine

    Je vais lui en mettre plein la vue a mon oral grâce à vous

    Merciiiiiiii

  14. #11
    Yoyo

    Re : Clonage Eucaryote

    content que ca t'aide

    Yoyo

  15. #12
    azzurela

    Re : Clonage Eucaryote

    Celà dit une dernière question que je me pose ...

    Voilà, j'ai ecrit que pour la production de protéines dans des cellules de mammifères, il fallait utiliser un plasmide contenant un site polyA, une origine de réplication virale ainsi qu'un promoteur de type viral.

    J'imagine donc, que le plasmide est considéré comme matériel viral et qu'il subira l'encapsidation avant de transfecter dautres cellules.

    Est ce correct? où y a t'il quelque chose qui m'échappe?

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  17. #13
    Yoyo

    Re : Clonage Eucaryote

    salut

    en general ce qui est utilisé est un systeme a base de Bacculovirus.
    Mais le le virus a ete debarassé de tous ses genes de virulence, du coup on ne se sert que de sa capacite a fortement trasncrire un gene grace a des promoteurs tres forts.

    Il n'y a pas d'encapsidation.

    Yoyo

  18. #14
    MaliciaR

    Re : Clonage Eucaryote

    Citation Envoyé par Yoyo Voir le message
    en general ce qui est utilisé est un systeme a base de Bacculovirus.
    Mais le le virus a ete debarassé de tous ses genes de virulence, du coup on ne se sert que de sa capacite a fortement trasncrire un gene grace a des promoteurs tres forts.

    Il n'y a pas d'encapsidation.

    Yoyo
    Oui, en gros c'est ainsi que les cellules souches à partir de peau ont été créées. Mais on a peur que la grande variabilité des virus provoque quand même des mutations (donc, des cancers, en général...).
    Mais ce que je ne comprends pas très bien c'est pourquoi on peut utiliser des plasmides pour faire exprimer des gènes d'intérêt dans des cellules eucaryotes, et ce sans intégration dans le génome. OU en tout cas, on ne nous a jamais mentionné une telle condition; ceci dit, le plasmide est censé avoir des promoteurs eucaryotes si je comprends bien... Quels sont les différences apportant des avantages et des inconvénients à ces deux systèmes?

    Cordialement,
    An expert is one who knows more and more about less and less.

  19. #15
    piwi

    Re : Clonage Eucaryote

    production de protéines subissant des modifications post traductionnelles typiquement eucaryotes.
    Volonté d'étudier les interactants (eucaryotes) d'une protéine.

    En y réfléchissant bien y a quand même plusieurs raisons qui font que l'on veuille faire exprimer une protéine par une cellule sans pour autant faire de la transgénèse.
    Je sers la science et c'est ma joie.... Il parait.

  20. #16
    azzurela

    Re : Clonage Eucaryote

    Bonjour !!

    Oui mais pour utiliser un plasmide dans une cellule de mammifères, faut il alors qu'il y a ait une origine de réplication de type virale ? ainsi qu'un promoteur type viral ???

    J'ai pas très bien compris les caractéristiques que doit avoir un plasmide d'EUC.

  21. #17
    mantOs

    Re : Clonage Eucaryote

    Le fait qu'on utilise un promoteur viral est car ces promoteurs sont des promoteurs dit "fort", permettant de bien surexprimer la protéine d'interêt, par un fort taux de transcription .
    Desole pour l'absence d'accentuation, je suis sur clavier QWERTY.

  22. #18
    anais13

    Cellule

    Je voudrais savoir la différence entre cellules transfusées et cellules infusées ou plus simplement infusion et transfusion.

    Merci d'avance

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