Bonjour,
je dois établir la relation entre la concentration en bactérie et la DO. Je cultive E. coli dans du milieu LB mais j'ai recommencé 2X la manip car les dillutions que je fais pour étaler sont trop importantes. Avant de me relancer dans les essais et perdre encore une semaine, pourriez-vous me donner quelques conseils (dilution à faire, précautions à prendre, calculs à effectuer, etc)
Merci
Si tu étales des cultures en phase stationnaire, dilue au moins d'un facteur 10^6 à 10^8 en procédant par dilution en série (attention, on a vite fait de se tromper, il vaut mieux tout noter les pipettages à faire sur un cahier).Envoyé par Ludi10
Procède de même pour tous tes points, sauf les tout premiers.
Si tu veux avoir une idée des dilutions à faire, prend la DO600 et fais un petit calcul (la relation entre DO600 et le nombre de cellules d'E.coli est connu) pour voir à quel nombre de cellules cela correspond.
Il est possible pour une raison que je ne dévoilerai pas (c'est peut-être le but de ton expérimentation) que sur gélose tu trouve moins de colonies que le nombre de cellules que tu pensais avoir étalé d'après ta DO600...
Blast up your life!
merci beaucoup; mes dillutions étaient en effet trop importantes car je dilluais déjà les premiers points de 10^7 à 10^9 en augmentant les dilutions tous les 2 prélèvements.
Le but de mon expériementation est de pouvoir utiliser la relation DO/nombre de bactéries lors des essais ultérieurs sans repasser par la culture.
