Bonjour!
Je travaille dans un laboratoire de physiologie animale et l'on souhaiterais tester un complément alimentaire qui améliore la croissance osseuse.
En gros, on souhaiterait tester ce complément et le comparer à d'autres sur des chondrocytes équins mis en culture.
Pour comparer entre eux ces compléments, on compte faire des courbes de croissance des chondrocytes en présence ou non des compléments testés et voir lequel a le meilleur effet s'il y en a un.
Le soucis c'est comment faire la courbe de croissance????
Je sais que je vais cultiver mes chondrocytes avec du milieu complémenté ou non (groupe contrôle) et que je vais tous les x jours récupérer les cellules et procéder à un comptage au bleu trypan et par la suite faire un dosage de protéines totale avec le kit BCA protein assay de chez Pierce.
Ce que je ne sais pas c'est quel est l'inoculum idéal de cellules? A quelle densité cellulaire dois je ensemencer mes boites? De quoi dépend ce paramètre? Du flacon de culture utilisé, des cellules,...? Si je veux pouvoir suivre mes cellules sur 10 jours par exemple en prélevant des cellules pour le comptage tous les 2j (afin d'établir ma courbe de croissance en plusieurs points)
Avant noËl, un premier test a été fait ou j'ai mis 25000 ou 50000 cellules par puit (12wells) mais les cellules n'ont quasi pas poussé!
Si qqu peut me conseiller qque chose : un lien internet, un protocole, une personne de contact...
D'avance merci !!!!
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