substrat de la phosphatase alcaline

[invitefef66bc2]

Bonjour,
J'aimerais savoir quelle est le nom du substrat utilisé en histo pour révéler la phosphatase alcaline et s'il est possible de l'utiliser directement sur une coupe pour détecter l'activité enzymatique .
Merci
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[invite32ebe868]

Je croit que c le PNPP (je ne sais plus ce que ça veut dire^^) incolore qui devient le PNP de couleur jaune et on dose par spectro (pas sur coupe)
On arrête la réaction par ajout de phosphate concentré
PS: je sais aussi qu'il faut être dans des condition avec un pH autour de 9 si ma mémoire est bonne mais cela est à vérifier

[invitefef66bc2]

merci j'ai finalement trouvé le substrat et effectivement il faut être à un ph alcalin pour que le produit de réaction soit ionisé (ce qui lui donne sa couleur jaune). Mais je voudrais savoir si quelqu'un a essayé le traitement d'une labteck avec ce réactif et s'il est possible de voir ainsi l'activité de la phosphatase.

[invite9eab997a]

Salut,
Je n'ai jamais essayé, par contre j'ai fait l'expérience avec les peroxydases endogènes.. J'ai oublié de les bloquer avant mon marquage et elles ont magnifiquement catalysé le substrat. J'utilisais un kit classique de révélation, ce qui te permets d'etre dans les bonnes conditions de pH.
Donc, à priori, je pense que ca devrait aussi marcher avec les phosphatases..
Bon courage

[A voir en vidéo sur Futura]

[invite6f53f6d0]

Bonjour

Pour reveler l activité phosphatase alcaline sur coupe, en general, pour deceler la presence d anticorps couplé à la PA, j utilise comme reactif le NBT et le BCIP (Nitrobleu de tetrazolium et bromochlorylindolophosphate).
Le BCIP est substrat de la phosphatase alcaline qui libere une fonction reductrice indol instable qui fait se lier deux molecules du reactif et reduit le NBT, provoquant un precipite bleu.

On l utilise beaucoup pour les hybridation in situ utilisant des sondes froides (Dig-UTP).

Voila
j espere avoir pu t aider
cho

[invitefef66bc2]

merci de vos réponses. Je m'en vais de ce pas essayer et je vous tiens au courant.