solubilisation de protéines

[invite19a800b0]

Salut tout le monde,

J'ai réussi à faire exprimer en BL21 ma protéine d'intêret mais je n'arrive pas à la solubiliser par le Tx-100 et SB3-14.
Est-ce que quelqu'un aurait un protocole efficace de solubilisation par l'urée?

Merci d'avance pour votre aide et bonne continuation à tous.
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[invitead282ff2]

Salut,
essais de faie une gamme d'urée entre 4 et 8M et suit la turbidimétrie à 350 nm.
Choisit alors la concentration minimale qui permet d'avoir la turbidimétrie minimale (6M c'est souvent bien).
Renature ensuite par simple dilution au 1/20° ou dialyse.
Reste a déterminer la tampon de renaturation qui dépend énormément de ta protéine.
Y'a plusieurs molécules qu'on peut rajouter qui sont sensées aider.
Me faudrait plus d'info sur ta protéine pour mieux te conseiller.
Est-ce une protéine membranaire ?
Ou exprimes tu ta protéine? Cytoplasme? Periplasme?
Etc...
Je peux t'envoyer une review sur le sujet si c'a peut t'aider, faut juste que je remet la main dessus.
Morphine