Bonjour à tous. Ca fait plaisir de retrouver ce forum, je n'y avais plus écrit depuis des mois !

L'objet de mon message est une enzyme habituellement bien pratique : la dispase. J'ai d'ailleurs été étonné de voir qu'il n'y avait pas de page sur wikipedia (c'est maintenant chose faite) ni sur futura sciences concernant cette enzyme, tant elle est couramment utilisée à mon labo. Ca doit être une coutume locale !

Nous utilisons cette protéase pour séparer épithélium et mésenchyme sur des arcs branchiaux d'embryons de souris (E10.5), afin d'effectuer des recombinaisons (épithélium du premier arc mis en coculture avec mésenchyme du second arc, par exemple). La séparation des tissus est une étape cruciale, car on étudie la signalisation intercellulaire, et quelques cellules du mesenchymes contaminant notre épithélium (ou l'inverse) peuvent suffire à produire des signaux induisant des expressions génétiques non voulues, et conduisant donc à des mésinterprétations. Le problème est justement que notre séparation n'est pas très propre, au point que parfois il est tout simplement impossible de séparer les tissus :

- soit la réaction marche "tellement bien", que l'epithélium perd toute inégrité et se retrouve dissocié au mieux en petits morceaux, au pire en cellules isolées

- soit la réaction ne marche pas assez bien, rendant la séparation impossible

- soit les tissus, bien que visiblement séparés, se détachent très difficilement car ils restent collés par une sorte de glue particulièrement difficile à éliminer. Dans ce cas, quand par chance on arrive à séparer les tissus sans les charcuter littéralement, les contaminations pas le tissu voisin sont inévitables.

Les concentrations utilisées sont très variable (selon la personne qui a préparé l'enzyme, ou selon la publi utilisée comme référence), les milieux également : H2O, D-MEM seul, D-MEM avec sérum, PBS... et parfois ca marche, parfois ca marche pas, avec une incroyable part d'aléatoire... Si quelqu'un a déjà rencontré (et pourquoi pas, résolu !) ce problème, merci de me tenir au courant !

Pour info, si vous voulez plus de renseignement sur l'expérience, cf. Expression and regulation of Lhx6 and Lhx7, a novel subfamily of LIM homeodomain encoding genes, suggests a role in mammalian head development, Grigoriou et al., 1998.

Merci !

Josquin