immuno sur des coupes ultra fines pour microscope electronique

[invite91bd1b7a]

Bonjour a tous
J'aimerais savoir si il est possible de fair de l'immunofluorescence sur des coupes ultrafines (60-100nm) sachant que l'échantillon utilisé à été fixé par une solution de 2%glutaraldehyde et 2%formaldhyde, suivi d'un enrobage dans de la resine (Spurr) pour obtenir des coupes fine, à l'ultramicrotome, déposées sur des grilles en cuivres.
Le probleme est que les anticorps risquent de ne pas passer à travers la résine.
qu'en pensez vous?
Voila je suis ouvert à tous les avis, conseils, suggestions.

Merci d'avance.

G.
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[invitefe7ff779]

Bonjour,
Je ne suis pas spécialiste, mais il est possible de faire un immunomarquage pour la microscopie électronique. Cependant la mise au point est loin d'être simple parce qu'il faut trouver le bon compromis entre une bonne fixation pour tes échantillons (bonne préservation ultrastructurale) et une bonne préservation de l'antigénicité de tes protéines!!!
Et puis si je me trompe pas ce n'est pas de la fluorescence que tu observes ce sont des billes d'or de diamètre différents (si tu veux observer deux protéines distinctes) pour être mis en évidence par le microscope électronique.
Si ça t'intéresse, je peux essayer de te trouver un protocol.

bon courage
chtefi

[invite91bd1b7a]

Bonjour,

Oui je connais cette methode elle s'appelle "immunogold" mais helas je cherche à pouvoir observer de la fluorescence. Mes coupes on deja été observé sous microscope électronique ayant trouver des parties interressantes on m'a demander de rajouter de la fluorescence pour observer des jonction GAP sous microscope à fluorescence.

Pour simplifier ma question est il possible de prendre des coupes pour microscope électronique de fair une immuno fluorescence pour une observation sous microscope à fluorescence?

Merci en tout cas pour ta reponse.

G.