ADN ARN extraction

[invite59cc5052]

Bonsoir à tous!

J'ai un petit problème en TP de biologie moléculaire, c'est lors de l'extraction de l'ADN et de l'ARN. Ma question est: pourquoi l'ADN, à pH basique se retrouve en phase aqueuse, et pourquoi l'ARN se retrouve en phase aqueuse (tous les 2 lors de l'extraction bien entendu).
J'ai horreur de presser les gens mais le problème c'est que j'aurais besoin de la réponse pour demain, il s'agit d'une question de mon TP d'aujourd'hui à laquelle je n'ai pas su répondre et je peux être interrogé a partir de demain dessus...

Merci d'avance à tous ceux qui sauront me répondre!

K.U.
-----

[ampicilline]

bonsoir,
bon,pour extraire l'ADN par exemple :aprés digestion des cellules par une solution de lyse pour faire sortir le matériel génétique ,on fait la purification par le phénole ,et on obtient deux phases :une organique qui contient tout les débris cellulaires puissque le phénole est un déproteinisant puissant et dans la phase liquide on trouve tout le matériel généitique qui n'a pas cette nature proteique (construit des bases nucléiques).
donc c'est la nature biochimique des constituants qui dértermine ce qui doit passer dans la phase liquide ou organique.

j'espére etait claire

[invite59cc5052]

Merci pour la réponse! On m'a dit qu'il y avait une histoire d'histones qui seraient plus ou moins attachées en fonction du pH, ce qui permettrai de rendre soluble ou non l'ADN en phase aqueuse car la présence d'histones favoriserait la solubilité en phase organique... Quel est le "mécanisme" qui permet de rendre les histones moins attachées avec le pH?

[IngDr]

bonsoir,
bon,pour extraire l'ADN par exemple :aprés digestion des cellules par une solution de lyse pour faire sortir le matériel génétique ,on fait la purification par le phénole ,et on obtient deux phases :une organique qui contient tout les débris cellulaires puissque le phénole est un déproteinisant puissant et dans la phase liquide on trouve tout le matériel généitique qui n'a pas cette nature proteique (construit des bases nucléiques).
donc c'est la nature biochimique des constituants qui dértermine ce qui doit passer dans la phase liquide ou organique.

j'espére etait claire

Attention : pour faire des extractions d'ARN, il faut un phenol acide, et pour l'ADN un phénol tamponné. Si tu prends un phenol acide pour une extraction d'ADN, tu as un rendement très bas, car l'ADN reste dans le phenol et non dans la phase aqueuse

[A voir en vidéo sur Futura]

[IngDr]

Merci pour la réponse! On m'a dit qu'il y avait une histoire d'histones qui seraient plus ou moins attachées en fonction du pH, ce qui permettrai de rendre soluble ou non l'ADN en phase aqueuse car la présence d'histones favoriserait la solubilité en phase organique... Quel est le "mécanisme" qui permet de rendre les histones moins attachées avec le pH?

En fonction du pH, la charge des protéines change (groupement acide/basique sur les chaines latérales avec différents pKa). Or l'interaction Histone/ADN est une interaction éléctrostatique(ADN - et queue des Histones + ) ==> si on modifie la charge des histones, on modifie l'interaction protéine ADN. (ce qui explique au passage que des modifications post traductionnelles comme l'acétylation qui neutralise la queue des histones, entrainent une débobinnage de la chromatine)

[invite59cc5052]

Merci beaucoup pour toutes ces réponses, j'ai maintenant enfin compris ce qui se passait pendant le TP!