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mutagénèse



  1. #1
    Clote

    mutagénèse


    ------

    bonjour j'ai un petit pb pr un exo

    on me parle d'une souche de levure DC1 se distinguant de la souche de reference par son incapacité a croitre sur lanosterol alors qu'elle peut pousser sur ergosterol. (le lanosterol apres plusieurs reaction donne de l'ergosterol en produit final)
    on veut cloner la forme fonctionnelle de ce gene defectueux ds un plasmide YCp50 pr l'inserer ds ces levures DC1.
    une fois que la souche a été transformé, on a recupéré 5000 clones sur milieu minimum+ ergosterol, puis on fait une replique sur MM+lanosterol et ça a permis a 2 clones de pousser.

    la question c'est "qu'a t'on selectionné a chaque étape?"
    ms moi je comprend pas a quoi sert la 1ere etape. pourquoi on passe pas directement a la 2eme, càd a la culture sur MM + lanosterol histoire de selectionner directement les clones recombinés???

    -----

  2. #2
    t0yt0y

    Re : mutagenese

    Bonjour à toi.

    En effet, vu sous cet angle, il ne semble pas y avoir de raisons pour faire la première expérience, sauf si :

    - on souhaite laisser pousser les levures et pour qu'elles aient le temps de se developper
    - si tu as omis de citer un antibiotiquer ou autre moyen de séléction dans le milieu minimum qui permettrait de mettre en évidence les levures transformées des levures non transformer.
    - Enfin, tu fais dans un second temps une réplique, et pour faire une réplique, il te faut quelque chose à répliquer, ce qui pourrait rejoindre la première hypothèse que j'ai fait.

    Bonne chance
    Allo, Stérique ?! Oui ... Ici Nétique !!!!

  3. #3
    MaliciaR

    Re : mutagenese

    Bonjour,

    Citation Envoyé par Clote Voir le message
    la question c'est "qu'a t'on selectionné a chaque étape?"
    Et on a sélectionné quoi alors?


    ms moi je comprend pas a quoi sert la 1ere etape. pourquoi on passe pas directement a la 2eme, càd a la culture sur MM + lanosterol histoire de selectionner directement les clones recombinés???
    Tu fais une réplique Càd que tu as 5000 clones qui poussent sur énostérol, mais il t'en faut précisément ceux qui sont capable de métaboliser le lanostérol pour produire de l'éno, grâce à un gène fonctionnel introduit avec le plasmide (je te laisse trouver l'expression qui correspond à ça, laquelle est la réponse à la question ci-dessus ). C'est bien d'avoir 5000 clones, mais comment savoir lesquels parmi eux métabolisent le lanostérol précisément grâce au plasmide, et non pas à cause d'une mutation ponctuelle, une mutation suppresseur ou que sais-je encore? En faisant une réplique sur milieu min + lano, tu peux retourner à ta boîte de 5000 et savoir lesquels précisément de tes 5000 clones métabolisent le lano grâce à la copie sauvage portée par le plasmide.

    J'espère que c'est clair...

    Cordialement,
    An expert is one who knows more and more about less and less.

  4. #4
    Clote

    Re : mutagenese

    ok merci bcp!

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