Bonjour à tous,
Je cherche des renseignements sur la transfection de cellules souches hématopoïétiques murines. A mon avis il faut utiliser un lentivirus pour ce type de cellules. Je cherche à y faire surexprimer très fortement les gènes MDR1a et MDRb de façon transitoire ou stable. Ces cellules vivent peu de temps en culture (48h je crois), comment faire alors une transfection efficace ?
Si on extrait toutes les cellules de la moelle osseuse on en a dans les 50 millions, si on trie les cellules souches par contre on obtient (en tout cas moi) entre 1500 et 2500 cellules souches à long terme et dans les 10 000 à 15 000 progéniteurs multipotents.
Vaut il mieux transfecter les cellules de moelle totale après lyse des globules rouges ou bien transfecter après le tri ?
Quel peut être le pourcentage d'efficacité de la transfection ?
Et le pourcentage de mort cellulaire ?
Pour info le gène MDR1 code pour une protéine transmembrannaire qui serait impliquée dans la résistance à des drogues (notamment celles de chimiothérapie) et confèrerait également une radioprotection.
Merci beaucoup pour votre aide !