Salut,
Je viens de me lancer dans la sélection d'un clone stable à partir de cellules C2C12. J'ai fait ma transfection et j'ai ajouté mon antibio de sélection G418 un jour aprés et j'attendais de voir mourrir mes cellules mais .... rien? Ca fait 3 jours ? Est ce normal ? combien de temps faut il attendre pour voir la sélection s'opérer
.
Merci d'avance.
Je ne comprends pas très bien la question : une sélection signifie que les cellules qui sont sensibles vont mourrir au contact de l'antibio; mais si tu as transfecté avec quelque chose conférant une résistance à cet antibio, les cellules où la transfection est réussie, ne vont pas mourrir... Donc, pourquoi t'attends-tu à ce que toutes tes cellules crèvent...?
Cordialement,
An expert is one who knows more and more about less and less.
Désolé, j'ai du mal m'exprimer. En fait j'imagine mal avoir 100% de transfection mais peut être 20% ou 40% donc je devrais avoir une mort massive des 80% ou 60% restantes. Mais au bout de combien de temps les cellules non transfectées vont elles mourrir ? C'est ça ma questoin.
Difficile de dire...
Vous avez fait un controle avec des cellules non transfectées histoire d'être certain que votre antibio peut bien effectuer la selection sur ces cellules?
Perso quand j'ai fais des clones stables de cellules (pas des C2C12) je n'ai pas opté pour une telle stratégie. Attention je fais des choses compliquées, j'aime bien... protéine d'intérêt-IRES-IL2. Du coup la séléction était rapide et efficace vu qu'il suffisait de cultiver les cellules avec des billes magnétiques coatées avec l'anticorps anti IL2. Un coup sur un aimant et les billes venaient avec cellules transformées collées dessus
Je sers la science et c'est ma joie.... Il parait.
J'ai écris une petite boulette c'est pas IL2 mais récepteur de IL2. Je précise juste pour être bien clair ^_^
Je sers la science et c'est ma joie.... Il parait.
Intéressant comme technique piwi ! Sinon, ce matin des cellules commencent à mourrir, je crois que j'étais un peu trop impatient...
"il faut laisser le temps au temps" comme dirait le pouet!
